基本信息：

小鼠食管平滑肌細胞- 食管下段的環(huán)形平滑肌（上段為骨骼肌），受迷走神經支配參與蠕動。賁門失弛緩癥模型中，其鈣通道異常可致食管下括約肌松弛障礙。

產品名稱 小鼠食管平滑肌細胞
組織來源 食管組織
產品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
方法簡介 公司實驗室分離的小鼠食管平滑肌采用yi蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測 公司實驗室分離的小鼠食管平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

該細胞只可用于科研。出現(xiàn)以下情況不予以重發(fā)：客戶造成細胞污染；客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好；細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片；細胞培養(yǎng)時經其它處理；細胞收到2天內，未告知相關情況。

細胞操作步驟:

傳代步驟：

棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1 - 2次。
加2ml消化液（0.25% Trypsin - 0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 - 2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
按6 - 8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1 - 2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
復蘇步驟：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1 - 2mL培養(yǎng)基后吹勻。換液并檢查細胞密度。
凍存步驟：
以T25瓶為例：
細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1 - 2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
1000RPM離心5分鐘去掉上清，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入 - 80℃冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存，記錄凍存管位置以便下次拿取。
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