基本信息：

小鼠胚胎干細(xì)胞（mESCs）- 源自囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的全能干細(xì)胞，可無限增殖并分化為三胚層所有細(xì)胞類型。體外依賴LIF維持未分化狀態(tài)，常用于基因編輯（如CRISPR）和發(fā)育生物學(xué)研究，也可誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞等模型構(gòu)建。

產(chǎn)品名稱 小鼠胚胎干細(xì)胞
組織來源 囊胚
產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
方法簡介 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干采用分離囊胚組織，去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，消化傳代純化制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 短梭形、多角形

傳代特性 可傳5-8代左右

消化液 0.025%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

該細(xì)胞只可用于科研。出現(xiàn)以下情況不予以重發(fā)：客戶造成細(xì)胞污染；客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好；細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片；細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理；細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知相關(guān)情況。
公司出售的產(chǎn)品：

傳代步驟：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1 - 2次。
加2ml消化液（0.25% Trypsin - 0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 - 2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
按6 - 8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1 - 2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
復(fù)蘇步驟：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1 - 2mL培養(yǎng)基后吹勻。換液并檢查細(xì)胞密度。
凍存步驟：
以T25瓶為例：
細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1 - 2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
1000RPM離心5分鐘去掉上清，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入 - 80℃冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存，記錄凍存管位置以便下次拿取。