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    上海帛科生物技術(shù)有限公司
       
       
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    Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞
    起訂量 (瓶)價(jià)格
    1-102350 /瓶
    ≥101250 /瓶
    • 品牌:帛科
    • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
    • 貨號(hào):BK-G63232
    • 發(fā)布日期: 2021-02-21
    • 更新日期: 2025-09-05
    產(chǎn)品詳請(qǐng)
    產(chǎn)地 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
    保存條件 低溫冷藏
    品牌 帛科
    貨號(hào) BK-G63232
    用途 產(chǎn)品僅用于科研
    組織來(lái)源 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
    細(xì)胞形態(tài) 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
    是否是腫瘤細(xì)胞
    CAS編號(hào)
    保質(zhì)期 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
    器官來(lái)源 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
    免疫類(lèi)型 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
    品系 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
    生長(zhǎng)狀態(tài) 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
    物種來(lái)源 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
    包裝規(guī)格 100ul*10 100ul*50
    純度 %
    是否進(jìn)口

    細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

    一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
    1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
    2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
    3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
    二.細(xì)胞處理:
    1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
    2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
    對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
    方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

    規(guī)格參數(shù):

    產(chǎn)品名稱(chēng):Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞
    規(guī)格 :100ul*10 100ul*50
    分類(lèi):克隆感受態(tài)細(xì)胞
    用途:生化試劑(用于科研試驗(yàn)研究)
    儲(chǔ)存條件: -70℃保存,必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個(gè)月。
    外觀:(性狀) 干冰運(yùn)輸,單加10kg干冰費(fèi)
    單位: 袋

    注意事項(xiàng):


    1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
    2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
    3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
    同一批感受態(tài)細(xì)胞,用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化(陽(yáng)性對(duì)照)能長(zhǎng)出密密麻麻的菌落,而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化,卻一個(gè)菌都沒(méi)長(zhǎng)出來(lái),重復(fù)了三次都這樣。請(qǐng)問(wèn)這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過(guò)關(guān),還是連接出了問(wèn)題?哪個(gè)可能性大些?
    答:應(yīng)該是連接的問(wèn)題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對(duì)照,確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請(qǐng)確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
    感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了,還能用來(lái)轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎?
    答:如-80冰箱儲(chǔ)存過(guò)程中沒(méi)有發(fā)生凍融的情況,是可以用來(lái)轉(zhuǎn)化的,但是由于凍存時(shí)間過(guò)長(zhǎng),轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降,如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的,如珍貴的樣品請(qǐng)選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。

    棕櫚酸甲酯(Standard for GC,≥98.0%(GC))Methyl palmitate質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥98.0%(GC)  小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousemaixmetalloproteinase1,MMP-1ELISAkit 96T/48T  ELISAKitC4小鼠補(bǔ)體蛋白4規(guī)格:48T/96T

    水楊酸甲酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Methyl salicylate質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99.5%(GC)  人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)試劑盒 Human SCF/MGF ELISA kit  Guineapigierleukin4,IL-4ELISAKit豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

    油酸甲酯(Standard for GC,≥99%(GC))Methyl oleate質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99%(GC)  RatInsulin,INSELISAKit大鼠(INS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  人抗EB病毒抗體(EBV)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

    癸氟奮乃靜(標(biāo)準(zhǔn)品)Fluphenazine Decanoate質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定  BrdU標(biāo)記法組織石蠟切片細(xì)胞繁殖NBT顯色檢測(cè)試劑盒10/20  小鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)試劑盒 Mouse cyclooxygenase-2,COX-2 ELISA Kit

    病毒包裝20樣本  (R型)原人參二醇規(guī)格  20(R)Protopanaxdiol

    RatFibronectin,FNELISA試劑盒大鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  (R)原人參三醇  20(R)Protopanaxatriol

    小鼠組織蛋白酶L(CTSL)ELISA試劑盒 ,英文名: CTSL ELISA Kit  R型)人參皂苷Rh1說(shuō)明書(shū)  20(R)Ginsenoside Rh1

    綿羊白介素1β(IL-1β)ELISA檢測(cè)試劑盒SheepIerleukin1β,IL-1βELISAKit 96T/48T  R型)人參皂苷Rh2品牌  20(R)Ginsenoside Rh2

    犬樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)試劑盒 Dog insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP3 ELISA kit  15356-70-4DL-薄荷醇規(guī)格  DL-Menthol

    952068-64-3巴利森苷D規(guī)格  Parishin D    組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-3)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

    952068-57-4巴利森苷E說(shuō)明書(shū)  Parishin E    組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)生物素明膠法比色定量檢測(cè)試劑盒20

    Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞95041-90-0毛蘭素別名:品牌  Erianin  組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)捕獲檢測(cè)試劑盒20

    94987-08-3絞股藍(lán)皂苷  Stevenleaf   組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20

    94987-08-3絞股藍(lán)皂苷XLIX  Gypenoside XLIX   組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-13)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20(10樣本)

    操作方法:

    1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
    3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
    4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

    5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

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