實(shí)驗(yàn)注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

人表皮色素細(xì)胞-淺色素裂解物HELM-l LIndigocarmine5,5′-靛藍(lán)二磺酸二鈉鹽10毫升USP級，98%

新生牛眼晶體上皮細(xì)胞;NBLE 人細(xì)胞，SW579細(xì)胞 RIN-m5F細(xì)胞，小鼠β胰島素瘤細(xì)胞 (細(xì)胞級) (≥99%, cell culture... 100ML 通用試劑

人膀胱上皮永生化細(xì)胞;SV-HUC-1N-芴氧羰酰基-D-炳安醋 FMOC-D-clcninq 79990-12-1

EPHA4 Others Human 人 EPHA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羥丙基倍他環(huán)糊精，英文名或英文縮寫：HPCD，級別：超，99%，規(guī)格：1毫克

CL-0104HEp-2(人喉表皮樣癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2硅酮 GE SE-54NA
CL-0112HMy2.CIR(B母細(xì)胞)5×106cells/瓶×2組雙鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：Histamine dixy7nochloride，級別：BR，99%，規(guī)格：1克

DDC Others Human  DOPA Decarboxylase / DDC 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-高脯酸 L-Pipecolic acid,99% 3105-95-1 50MG 通用試劑

毛細(xì)胞裂解物HHDPCL草醋高鐵銨 Fqrric cmmonium oxclctq trihydrctq1368-4-3

EB-3[EB3]細(xì)胞，樣Butt瘤細(xì)胞 腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞,786-O細(xì)胞 前脂肪細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2'-nitnoacetanilide鄰硝基乙酰本胺500毫克BR

兔間變表皮鱗株;VX2枸櫞酸鹽培養(yǎng)基NA
雜交瘤(B類);Z1510A2G6A2F8低粘度羥丙基纖維素HPC, hydroxypropyl cellulose質(zhì)量規(guī)格：150~400 mpa.s,BR

Bel-7404細(xì)胞，細(xì)胞 皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHOL(+)1酸二鈉二水(>98%,BC )L(+) tartrate dihydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC

L1210(小鼠細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸吡哆胺(>98%,BC )Pyridoxamine, di質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC

Promocell C-28012 Mesenchymal Stem CellChondrogenic Differe. Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨分化培養(yǎng)基(即用型) 100ml水楊酸鈉(>99%,USP) salicylate質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP

成纖維細(xì)胞總RNAHLF NA3-(環(huán)己氨基 )-1-丙磺酸鈉(分子生物學(xué)級)CAPS,  salt質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級
CA12 Others Mouse 小鼠 Ca12 / Car12 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 恩諾沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）Enrofloxacin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人細(xì)胞;SF17鹽酸恩諾沙星Enrofloxacin HCL質(zhì)量規(guī)格：>98.5%

人臍帶間葉干細(xì)胞(臍帶)(HUMSC) (5×105)鹽酸恩諾沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）Enrofloxacin HCL質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CM-R008大鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL佐米曲普坦Zolmitriptan質(zhì)量規(guī)格：>99%

小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte 小鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL胸腺肽alpha 1Thymosin alpha 1

本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。