本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

8910PM細胞，人細胞 小鼠細胞,EMT6細胞 腎小管上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)十六烷500毫克2～8℃

Dami(人巨核細胞細胞) 5×106cells/瓶×2十八烷基基化銨 Trimethyloctadecylammonium chloride,≥... 112-03-8 1G 通用試劑

HTEpC Pellet 人類氣管上皮細胞團塊 > 1 mio.cells 人骨骼肌細胞cDNAHSkMC cDNA異麥芽三糖 ISOMcLTOTRIOSq 3371-20-4

CL-0066COLO 205(人細胞)5×106cells/瓶×2potewwiumcaonaTEANxy7noUS碳酸鉀,無水ACS級白色顆粒粉末RTsigma

FCGR2B Others Human 人 CD32b / FCGR2B CHO細胞裂解液 (陽性對照) 101-80-44，4-二基二本4,4'-Oxydianiline
大鼠*基質細胞完全培養基 100mL丙硫異煙胺質量規格：>98.5%,BRProthionamide

BV-2小鼠小膠質細胞 Microglial cells of BV-2 mice 1640+20%FBS丙硫異煙胺(標準品)質量規格：>98%,標準品Prothionamide

EREG Protein Human 重組 Epiregulin / EREG 蛋白 (Fc 標簽)硬脂酸甲酯(>99.5%(GC),標準物質)質量規格：>99.5%(GC),標準物質Methyl Stearate

VE(內皮細胞) 5×106cells/瓶×2 胰島β細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)亞麻酸甲酯(>98.0%(GC),標準物質)質量規格：>98.0%(GC),標準物質Methyl Linolenate

大鼠嗜堿性粒細胞性細胞;RBL-2H3亞油酸甲酯(>99.0%(GC)，標準物質)質量規格：>99.0%(GC)，標準物質Methyl Linoleate
小鼠單核巨噬細胞;J774A.1氯化鍶六水Strontium chloride, hexhydrate質量規格：AR,≥99%

tTA基因修飾的小鼠(B類);F9-CAG-tTA-1A3 IV型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL硫酸鈣二水Calcium sulfate, dihydrate質量規格：>99%,AR

AGS胃腺癌細胞 Human2'-脫氧胞苷'-5'-1酸(dCMP)dCMP, 2'-Deoxycytidine 5'-monophosphate, free acid質量規格：>98%,分子生物學級

TNFRSF1B Others Mouse 小鼠 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 細胞裂解液 (陽性對照) DSS(分子生物學級)DSS質量規格：分子生物學級

*成纖維細胞-心房HCF-aa腺苷脫氨酶(15U/mg)Adenosine deaminase from calf spleen 15U/mg質量規格：15U/mg,進口
人脈絡叢成纖維細胞總RNAHCPF NA丁二酸二甲酯(>99%,BR)Dimethyl succinate質量規格：>99%,BR

CD83 Others Mouse 小鼠 CD83 / HB15 人細胞裂解液 (陽性對照) 二甲基甲酮鈉鹽(>97%,BR)Dimethylglyoxime  salt質量規格：>97%,BR

U87MG 人惡性膠質母細胞瘤細胞直接藍71(≥50%,BR)Direct blue 71質量規格：≥50%,BR

CL-0307SW1116(人腺癌細胞)5×106cells/瓶×2天狼猩紅Direct red 80質量規格：BS

RSC, 大鼠雪旺細胞DL-苯甘氨酸(>98%，BC)DL-alpha-Phenylglycine質量規格：>98%，BC

實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
霍山石斛PCR試劑盒主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR