基本信息：

大鼠角膜成纖維細胞分布于角膜基質層，合成膠原蛋白等細胞外基質，維持角膜的透明性與力學強度。

產品名稱 大鼠角膜成纖維細胞
組織來源 眼角膜組織
產品規格 5×10^5Cells/T25
方法簡介 公司實驗室分離的大鼠角膜成纖維采用yi蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測 公司實驗室分離的大鼠角膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

該細胞只可用于科研。出現以下情況不予以重發：客戶造成細胞污染；客戶不正確操作致細胞狀態不好；細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片；細胞培養時經其它處理；細胞收到2天內，未告知相關情況。

細胞操作步驟:

傳代步驟：

棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1 - 2次。
加2ml消化液（0.25% Trypsin - 0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1 - 2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
按6 - 8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1 - 2mL培養液后吹勻。
將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
復蘇步驟：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1 - 2mL培養基后吹勻。換液并檢查細胞密度。
凍存步驟：
以T25瓶為例：
細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1 - 2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
1000RPM離心5分鐘去掉上清，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入 - 80℃冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存，記錄凍存管位置以便下次拿取。
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