PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：坎氏弧菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Bupivacaine   18010-40-7  中文名：鹽酸布比卡因  分子式：C18H29ClN2O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Buergerinin G  263764-83-6  中文名：  分子式：C9H12O4  度：%  關(guān)鍵詞：  北玄參; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠酶(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Bromhexine   611-75-6  中文名：鹽酸溴己新  分子式：C14H21Br2ClN2  度：98.0%      小鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Brinzolamide  138890-62-7  中文名：布林佐胺  分子式：C12H21N3O5S3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠胃動素(MTL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Bortezomib  179324-69-7  中文名：硼替佐米  分子式：C19H25BN4O4  度：98.0%      小鼠內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
小鼠Ⅰ型膠原N末端肽(X)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Clevidipine butyrate  中文名：丁酸氯維地平  分子式：C21H23Cl2NO6  度：98.0%

小鼠Ⅰ型膠原C端肽elisa試劑盒   小鼠Ⅰ型膠原C端肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠Ⅰ型膠原C端肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠Ⅰ型膠原C端肽試劑盒、小鼠Ⅰ型膠原C端肽eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Benzanthrone  1982/5/3  中文名：苯并蒽酮  分子式：C17H10O  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Deoxyneocryptotanshinone  中文名：  分子式：C19H22O3 

小鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Loxoprofen  中文名：洛索洛芬  分子式：C15H18O3 

小鼠8異素elisa試劑盒   小鼠8異素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠8異素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠8異素試劑盒、小鼠8異素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Benzanthrone  1982/5/3  中文名：苯并蒽酮  分子式：C17H10O
坎氏弧菌PCR檢測試劑盒說明書HFF-1(人成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2(S,S)-(+)-2,3-丁二醇(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)(S,S)-(+)-2,3-Butanediol

hMoCD14+-PB single donorPellet 人類外周血CD14+單核細胞團塊單一來源，超 > 1 mio.cells 人腦微內(nèi)皮細胞RNAHBMEC miRNA5 μg(-)-樟腦烷酸(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)(-)-Camphanic Acid

CM-M026小鼠骨髓基質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基100mL苦玄參苷IV(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品Picfeltarraenin IV

ENPP3 Others Cynomolgus 食蟹猴 ENPP3 / CD203c 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 瓜子金皂苷XXXI(對照品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品Polygalasaponin XXXI

神經(jīng)細胞培養(yǎng)基NM俾斯麥棕R質(zhì)量規(guī)格：BSBismarck Brown R
CADM3 Others Mouse 小鼠 CADM3 / IGSF4B / NECL1 人細胞裂解液 (陽性對照) 腺苷 3’-單1酸鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口Adenosine 3'-monophosphate  salt

腎皮層上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)腺苷 3',5'-二1酸鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口Adenosine 3',5'-diphosphate  salt

NRG1 Others Human 人 NRG1-beta 1 (ECD) 人細胞裂解液 (陽性對照) 腺苷 2',5'-二1酸鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口Adenosine 2',5'-diphosphate  salt

大鼠腎上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL腺苷5'-O-硫一1酸二鋰鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口Adenosine 5'-O-thiomonophosphate dilithium salt

MR1 [derivative of HB-11048]中國倉鼠X小鼠B細胞雜交瘤 MR1 [derivative of HB-11048] Chinese hamster X mouse B lymphocyte hybridoma RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSα-酮戊二酸(標準品)質(zhì)量規(guī)格：>98%,標準品2-Ketoglutaric acid
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。