PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：極細(xì)密螺旋體PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Atractylodin  55290-63-6  中文名：蒼術(shù)素  分子式：C13H10O    Humanai-ribosomalPproteinaibody,ARPA/Rib-PELISAKit 人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Crenulatin  63026-02-8  中文名：大花紅天素  分子式：C11H20O6    HumanD-Dimer,D2DELISA試劑盒人D二聚體(D2D)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

1-Monopalmitin  542-44-9  中文名：1-棕櫚酸單甘油酯  分子式：C19H38O4    組織IRAK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Ethyl β-D-apiofuranoside  1932405-61-2  中文名：  分子式：C7H14O5    Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Myricadenin A  1612239-23-2  中文名：  分子式：C39H40O17    兔子調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  2,2-Diphenylglycine  中文名：  分子式：C14H13NO2  度：98.0%

兔組織因子elisa試劑盒   兔組織因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔組織因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔組織因子試劑盒、兔組織因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Allopurinol  315-30-0  中文名：別嘌醇  分子式：C5H4N4O  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

兔組織因子   英文名稱：   Rabbit Tissue Factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TF  Allitol  488-44-8  中文名：蒜糖醇  分子式：C6H14O6  度：%  關(guān)鍵詞：  中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

兔組織金屬蛋白酶抑制因子1   英文名稱：   Rabbit Tissue Inhibitor of Metalloproteinases 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TIMP-1  Allitol  488-44-8  中文名：蒜糖醇  分子式：C6H14O6 

兔子組織因子(TF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Allyl cinnamate  1866-31-5  中文名：肉桂酸烯丙酯  分子式：C12H12O2
極細(xì)密螺旋體PCR檢測試劑盒直銷IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 耐斯糖（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定NISTOSE

原代腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml對羥基苯乙酮（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：供含量測定用4'-Hydroxyacetophenone

OS-732細(xì)胞，細(xì)胞(瘤株) 人細(xì)胞,SiHa細(xì)胞 人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNAHA-sp NA3,29-二苯甲酰基栝樓仁三醇（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定3,29-Dibenzoyl rarounitriol

非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgR;VERO/IgR牛磺豬去氧膽酸（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定TAUROHYODEOXYCHOLIC ACID  SALT

FZD5 Others Human 人 Frizzled-5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 苦玄參苷X（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品Picfeltarraenin X
CRT細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞 曲霉 人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞RNAHA-h miRNA5 μg2-Octanol2-辛醇25克AR，97%

RTE(大鼠氣管上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×21,12-十八烷二醇 1,12-OCTcDqCcNqDIOL 76-73-0

HBL-100(人整合SV40基因的上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0361HPAC(人胰腺腺泡上皮癌)5×106cells/瓶×2 水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S2肖醋錳50%溶液 Mcngcnous nitnctq hqxchydrctq 17141-63-8

人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞;NCI-H2921-Pentadecanol1-十五醇500克CP，98%

人表皮角質(zhì)細(xì)胞-(HEK-a) ( 5×105 )LB肉湯LB Broth (Lennox)
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。