PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Alogliptin benzoate  850649-62-6  中文名：阿格列汀苯甲酸鹽  分子式：C25H27N5O4    人組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2-[(6-Chloro-3,4-dihydro-3-methyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl)methyl]benzonitrile  865758-96-9  中文名：  分子式：C13H10ClN3O2    人組織蛋白酶抗體(CathAb)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Alogliptin  850649-61-5  中文名：阿格列汀  分子式：C18H21N5O2    人組織蛋白酶S(cath-S)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

(-)-Mandelic acid benzyl ester  97415-09-3  中文名：D-(-)-扁桃酸芐酯  分子式：C15H14O3    人組織蛋白去乙酰化酶elisa試劑盒   人組織蛋白去乙酰化酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織蛋白去乙酰化酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白去乙酰化酶試劑盒、人組織蛋白去乙酰化酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

4-(4-Fluorophenyl)-6-isopropyl-2-[(N-methyl-N-methylsulfonyl)amino]pyrimidinyl-5-yl-formyl  147118-37-4  中文名：  分子式：C16H18FN3O3S    人組織蛋白酶抗體elisa試劑盒   人組織蛋白酶抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織蛋白酶抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白酶抗體試劑盒、人組織蛋白酶抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
兔子可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  (Z)-Lachnophyllum lactone  81122-95-4  中文名：  分子式：C10H10O2  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  8,14-Epoxyergosta-4,22-diene-3,6-dione  1265908-20-0  中文名：  分子式：C28H40O3 

兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              8-Bromo-7-(but-2-yn-1-yl)-3-methyl-1H-purine-2,6(3H,7H)-dione  中文名：  分子式：C10H9BrN4O2 

兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  (tert-Butoxycarbonyl)oxycefcapene pivoxil  中文名：  分子式：C28H37N5O10S2  度：98.0%

兔子可溶性CD40配體elisa試劑盒   兔子可溶性CD40配體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子可溶性CD40配體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（分裝），產(chǎn)品別名：兔子可溶性CD40配體試劑盒、兔子可溶性CD40配體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     8-Hydroxyhyperforin 8,1-hemiacetal  中文名：  分子式：C35H52O5
病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書LAYN Others Human 人 Layilin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 硫酸鈣(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRCalcium sulfate, anhydrous

CM-H084人臍平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL二環(huán)己基碳二亞胺(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRDCC, Dicyclohexylcarbodiimide

SERPINI1 Others Mouse 小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 丁二酸二甲酯(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRDimethyl succinate

小鼠角膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL二甲基甲酮鈉鹽(>97%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRDimethylglyoxime  salt

L6565小鼠克隆細(xì)胞系 L6565 murine leukemia cell line RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS直接藍(lán)71(≥50%,BR)質(zhì)量規(guī)格：≥50%,BRDirect blue 71
軟骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-苯甲酰-2'-脫氧胞苷質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRbz-dC

MAP3K8 Others Human 人 TPL2 / MAP3K8 / MEKK8 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) N6-苯甲酰-2'-脫氧腺苷質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRbz-dA

KM小鼠子瘤株;U145'-O-三苯甲基尿苷質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRTrt-rU

NIH/3T3細(xì)胞，胚胎成纖維細(xì)胞 人高轉(zhuǎn)移細(xì)胞,LM3細(xì)胞 CL-0104HEp-2(人喉表皮樣癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2Trt-dU質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRTrt-dU

倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21N2-洛沙坦-洛沙坦(洛沙坦雜質(zhì))質(zhì)量規(guī)格：N2-Losartanyl-losartan (Losartan Impurity)
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。