PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：中華根瘤菌通用PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

6-Hydroxyrubiadin  中文名：6-羥基甲基異茜草素  分子式：C15H10O5    Acetaldehydeoxime

6-Fluoro-3-(4-piperidinyl)-1,2-benzisoxazole   中文名：  分子式：C12H14ClFN2O    乙酰胺   100g

6-Deoxy-3-O-methyl-β-allopyranosyl(1→4)-β-cymaronic acid δ-lactone  中文名：  分子式：C14H24O8    Acetamide                 

6-Chloroguanine riboside  中文名：6-氯鳥嘌呤核苷  分子式：C10H12ClN5O4    乙脫氫酶（ALDH）試劑盒   紫外分光光度法   50管/48樣

6-Benzyloxypurine  中文名：6-芐氧基嘌呤  分子式：C12H10N4O    輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒   可見分光光度法   50管/24樣
兔熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  5-Aminoindole  5192-03-0  中文名：5-氨基吲哚  分子式：C8H8N2 

兔熱休克蛋白20(HSP-20)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  5-Aminoindole  中文名：5-氨基吲哚  分子式：C8H8N2  度：98.0%

兔去甲上腺素elisa試劑盒   兔去甲上腺素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔去甲上腺素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔去甲上腺素試劑盒、兔去甲上腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  5-Aminoindazole  19335-11-6  中文名：5-氨基吲唑  分子式：C7H7N3  度：98.0%   

兔去甲上腺素(NA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           5-Aminoindazole  中文名：5-氨基吲唑  分子式：C7H7N3 

兔去甲上腺素(NA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  4-Benzoyl-3-methyl-1-phenyl-5-pyrazolone  中文名：4-苯甲酰基-3-甲基-1-苯基-5-吡唑啉酮  分子式：C17H14N2O2  度：98.0%
中華根瘤菌通用PCR檢測試劑盒直銷NCI-H1299(人非小細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型 H1N1 (A/USSR/90/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-去甲基羅格列酮-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口N-Desmethyl Rosiglitazone-d4

原代心肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml羅格列酮（鉀鹽）質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Rosiglitazone (potassium salt)

EDAR Others Rat 大鼠 EDAR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羅格列酮鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口rosiglitazone hydrochloride

大鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL5-羥基羅格列酮質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口5-Hydroxy Rosiglitazone

HaCaT人永生化表皮細(xì)胞 HaCaT immortalized human epidermal cells DMEM+10% FBS去甲異波爾定（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Norisoboldine
TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) GENEPAGE6%EZSQUEEZE*CLDPAK*6% GENE-PAGE, 擠壓式瓶裝生物技術(shù)級10X75MLCOLD

HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞氧基三本基錄化鏻 (Mqthoxymqthyl)triphqnylphosphonium chloridq 4009-98-7

RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元 [X464-20C]細(xì)胞 Vero(非洲綠猴腎細(xì)胞)左卡泥汀相關(guān)物質(zhì)A Lqvoccrnitinq Rqlctqd CoMpound c;3-ccrboxy-N,N,N-triMqthyl-2-propqn-1-cMiniuM chloridq 6238/8/2

人十二脂腸腺癌;HuTu-80抑肽酶(牛肺)shēng huà shì jì容量：RT25克

CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-芴甲氧羰酰基-L-亮酸NA
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。