PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：同羊病毒2型羊關(guān)聯(lián)惡性卡他熱病毒PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  中文名：  分子式：C5H6N4O3    乙醇脫氫酶（ADH）測定試劑盒（紫外比色法）

6-Amino-1,3-dimethyluracil  中文名：  分子式：C6H9N3O2    微量游離血紅蛋白（FHb）測定試劑盒（比色法）

6,7-Dihydroneridienone A  中文名：  分子式：C21H28O3    超微量Na+K+–ATP酶測定試劑盒

6,6'-Di-O-sinapoylsucrose  中文名：6,6'- 二芥子酰基蔗糖  分子式：C34H42O19    胰蛋白酶測定試劑盒（紫外比色法）                 

6-(5-Chloropyridin-2-yl)-7-hydroxy-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin-5-one  中文名：  分子式：C11H7ClN4O2    乙醇酸氧化酶測試盒   可見分光光度法   50管/48樣
兔基質(zhì)金屬蛋白酶-3(rabbit MMP-3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  中文名：  分子式：C18H24N4O18  度：%

兔基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           5-(4-((3-chloro-4-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-6-yl)furan-2-carbaldehyde  中文名：  分子式：C26H17ClFN3O3 

兔基質(zhì)金屬蛋白酶-2(rabbit MMP-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     4-Methyl-2-propyl-1H-benzimidazole-6-carboxylic acid  中文名：  分子式：C12H14N2O2 

兔基質(zhì)金屬蛋白酶1elisa試劑盒   兔基質(zhì)金屬蛋白酶1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔基質(zhì)金屬蛋白酶1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔基質(zhì)金屬蛋白酶1試劑盒、兔基質(zhì)金屬蛋白酶1elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  5-Amino-1-naphthol  83-55-6  中文名：5-氨基-1-萘酚  分子式：C10H9NO 

兔基質(zhì)金屬蛋白酶-13(rabbit MMP-13)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  4-Oxododecanedioic acid  30828-09-2  中文名：  分子式：C12H20O5
同羊病毒2型羊關(guān)聯(lián)惡性卡他熱病毒PCR檢測試劑盒直銷NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 MDA-MB-231(癌細胞)氨芐西林/氨芐青霉素(標準品)質(zhì)量規(guī)格：含量測定Ampicillin Trihydrate

CL-0424RK1(大鼠腎細胞)5×106cells/瓶×2阿替美唑鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRAtipamezole HCl

ICOSLG Others Human 人 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 人細胞裂解液 (陽性對照) 阿替美唑鹽酸鹽(標準品)質(zhì)量規(guī)格：>98%,標準品Atipamezole HCl

人內(nèi)根殼細胞RNAHHIRSC miRNA5 μg阿糖胞苷（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品Cytarabine

QBC939細胞，人細胞 褐鼠胰島素瘤上皮細胞,RIN-m細胞 NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系達卡巴嗪質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP31,BR,可用于細胞培養(yǎng)Dacarbazine
人羊膜上皮細胞RNAHAmEpiC miRNA5 μg雌激素酮硫酸鹽，去氫表雄酮硫酸鈉質(zhì)量規(guī)格：>98%Dehydroepiandrosterone-3-sulfate

SELP Others Mouse 小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人細胞裂解液 (陽性對照) 纈更昔洛韋鹽酸鹽 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USPValganciclovir hydrochloride

SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞;COS-1肌醇質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRInositol

CL187/CCL187細胞，人細胞 人色素瘤細胞,M14細胞 人細胞;RPMI-8226 [RPMI8826]肌醇(標準品)質(zhì)量規(guī)格：>99%,標準品Inositol

Hela(人細胞) 5×106cells/瓶×24'-羥基氟比洛芬質(zhì)量規(guī)格：美國進口4'-Hydroxy Flurbiprofen
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。