PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：綿羊痘病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

6-Amino-1-methyluracil  2434-53-9  中文名：  分子式：C5H7N3O2    兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Gimeracil  103766-25-2  中文名：吉莫斯特  分子式：C5H4ClNO2    Rat vascular endothelial cell growth factor receptor 1 (VEGFR-1) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1(VEGFR-1)ELISA試劑盒

Amlexanox ethyl ester  68301-99-5  中文名：  分子式：C18H18N2O4    HumanAi-keratinaibody,AKAELISAKit 人抗角蛋白抗體(AKA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

1,2-Cyclohexanedicarboximide  7506-66-3  中文名：  分子式：O2    Humancytokeratin13,CK-13ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白13(CK-13)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Perospirone   129273-38-7  中文名：鹽酸哌羅匹隆  分子式：C23H31ClN4O2S    組織HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次
兔堿性成纖維細(xì)胞生長因子   英文名稱：   Rabbit Basic Fibroldast Growth Factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BFGF  4β-Hydroxywithanolide E  54334-04-2  中文名：4β-羥基醉茄內(nèi)酯E  分子式：C28H38O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  蛻皮甾體拮抗劑; ; 酸漿屬; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

兔堿性成纖維生長因子(rabbit b-FGF/FGF-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C18H27N3O4 

兔堿性0酸酶(ALP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  5-(4-((3-chloro-4-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-6-yl)furan-2-carbaldehyde  中文名：  分子式：C26H17ClFN3O3  度：98.0%

兔基質(zhì)細(xì)胞衍化生長因子1a   英文名稱：   Rabbit Somal cell Derived Factor 1a   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SDF1a  4-Benzoyl 4'-methyldiphenyl sulfide  中文名：4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚  分子式：C20H16OS  度：98.0%

兔基質(zhì)金屬蛋白酶-9(rabbit MMP-9)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  中文名：  分子式：C18H24N4O18
綿羊痘病毒PCR檢測試劑盒說明書NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 3T3-L1(小鼠脂肪細(xì)胞)N'-Fmoc-L-賴氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%Fmoc-Lys-OH

CL-0318B16-F1(小鼠色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2Fmoc-天門冬氨酸-β-芐酯質(zhì)量規(guī)格：>98%Fmoc-L-aspartic acid β-benzyl ester

REG1B Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1B / PSPS2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 芴甲氧羰基-L-天冬氨酸-1-叔丁酯質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BRFmoc-Asp(OH)-OtBu

人真皮微內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHDMEC NAFmoc-L-賴氨酸鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：0.98Fmoc-Lys-OH·HCl

MDA-MB-435S細(xì)胞，人癌細(xì)胞 鼠成纖維細(xì)胞系,GR細(xì)胞 原代神經(jīng)元細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml氧化白藜蘆醇(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Oxyresveratrol
人纖維環(huán)細(xì)胞HAFC1-溴-4-壬基苯(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)1-Bromo-4-nonylbenzene

FSTL1 Others Mouse 小鼠 FSTL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1-溴-4-戊苯(>90.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)1-Bromo-4-pentylbenzene

大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-61-溴-4-己苯(>90.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)1-Bromo-4-hexylbenzene

大鼠細(xì)胞;UMR-106 ，LTEP-a-2細(xì)胞 MSCS細(xì)胞，猴的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞1-溴-4-庚苯(含穩(wěn)定劑銅屑)(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)1-Bromo-4-heptylbenzene (stabilized with Copper chip)

PANC-1, 人細(xì)胞 Human1-溴-4-正辛基苯(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)1-Bromo-4-n-octylbenzene
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。