技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：寄生水霉PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
5-Aminouracil  中文名：5-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2  度：98.0%  小鼠促甲狀腺素釋放激素(H)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Amoxicillin trihydrate  中文名：羥氨芐青霉素三水合物  分子式：C16H19N3O5S  度：98.0%  小鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-Amino-4-methylbenzamide  中文名：3-氨基-4-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O  度：98.0%  小鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

2-(2-Aminothiazole-4-yl)-2-methoxyiminoacetic acid  中文名：氨噻肟酸  分子式：C6H7N3O3S  度：98.0%  小鼠促卵泡素   英文名稱：   Folliopin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FSH

5-Aminoindazole  中文名：5-氨基吲唑  分子式：C7H7N3  度：98.0%  凋亡相關(guān)因子   英文名稱：   apoptosis-inducing factor Fas   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Fas
土壤纖維素酶（S-CL）測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  2374-03-0  中文名：4-氨基-3-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%   

土壤無機(jī)0（S-PHOS）含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  116-63-2  中文名：4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S  度：98.0%   

土壤無機(jī)0（S-PHOS）含量測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O  度：99.0%

土壤脫氫酶(SDHA)測試盒   可見分光光度法   50管/24樣              4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O 

土壤酸性蛋白酶試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide  中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺  分子式：C14H16N2O4S  度：99.0%
寄生水霉PCR檢測試劑盒直銷P3HR1細(xì)胞，人EBV陽性B瘤細(xì)胞 大鼠細(xì)胞株,DSL-6A/C1細(xì)胞 人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNAHA-c cDNA阿立哌唑-d8質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Aripiprazole-d8

NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2阿立哌唑-d8 (丁基-d8)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Aripiprazole-d8 (Butyl-d8)

CoC1(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0142LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠氣管上皮細(xì)胞;RTE阿扎那韋-標(biāo)記d4質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Atazanavir - Labeled d4

中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO4'-羥基托莫西汀質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口4'-Hydroxy Atomoxetine

PTPN2 Others Human 人 PTPN2 / PTPT 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 脫氯阿托伐醌質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Deschloro Atovaquone
PRLR Others Human 人 PRLR / Prolactin Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3,4-二羥基本酸100毫克

人內(nèi)根殼細(xì)胞總RNAHHIRSC NA對基-α-D-吡... 4-Nitrophenyl α-D-galactopyranoside 7493-95-0 100MG 通用試劑

VEGFA Others Rat 大鼠 VEGF164 / VEGFA 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1 JP-TS cVIcTION FUqL 6474-47-8

中國倉鼠卵巢細(xì)胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr-偶氮脒類引發(fā)劑V401克2～8℃

NCI-H460[H460]細(xì)胞，大細(xì)胞細(xì)胞 人,H4細(xì)胞 小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/322，4-二硝基扶本(劇毒)(陰涼)2,4-fluorobenzene