技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：羅西奧病毒PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  2374-03-0  中文名：4-氨基-3-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%      小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3α   英文名稱：   Macrophage Inflammatory protein 3α   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MIP-3α

4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  116-63-2  中文名：4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S  度：98.0%      小鼠巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

4-Amino-3,5-dichloropyridine  22889-78-7  中文名：  分子式：C5H4Cl2N2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide  52298-44-9  中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺  分子式：C14H16N2O4S  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

4-Allyloxy-2-hydroxybenzophenone  2549-87-3  中文名：4-丙烯氧基-2-羥基二苯甲酮  分子式：C16H14O3  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
溶菌酶（LZM）測試盒（帶標(biāo)準(zhǔn)）   Lysozyme (LZM) test case (with standard)  Ranitidine   66357-59-3  中文名：鹽酸雷尼替丁  分子式：C13H23ClN4O3S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人組織轉(zhuǎn)谷酰胺酶(TGM2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human TGM2 (ansglaminase 2, Tissue) ELISA Kit  3-[4-[(2-Chloro-5-iodophenyl)methyl]phenoxy]tetrahydro-furan  915095-94-2  中文名：  分子式：C17H16ClIO2  度：98.0%   

人組織因子途徑抑制因子(TFPI)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human TFPI (Tissue Factor Pathway Inhibitor) ELISA Kit  3-[2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)-3-quinolinyl-2-propenal  148901-68-2  中文名：  分子式：C21H16FNO  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人組織因子途徑抑制物elisa試劑盒   人組織因子途徑抑制物試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人組織因子途徑抑制物試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織因子途徑抑制物試劑盒、人組織因子途徑抑制物elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  3-Amino-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one  4149/6/8  中文名：3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮  分子式：C9H9N3O 

人組織因子elisa試劑盒   人組織因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人組織因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織因子試劑盒、人組織因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  3-Allylrhodanine  中文名：3-烯丙基羅丹寧  分子式：C6H7NOS2  度：99.0%
羅西奧病毒PCR檢測試劑盒直銷QGY-7701(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 EphA3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 醋酸組氨瑞林 Histrelin Acetate質(zhì)量規(guī)格：BR,度>98%

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO 205青霉素V鉀Penicillin V potassium salt質(zhì)量規(guī)格：1440~1680 U/mg,BR

CD47 Others Human 人 CD47 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2'-脫氧肌苷2'-deoxyinosine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓鹽酸尼非卡蘭Nifekalant hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

3T3TK細(xì)胞，小鼠成纖維細(xì)胞 TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞,JEG-3-VP16-TNFa細(xì)胞 人滑膜細(xì)胞RNAHS miRNA5 μg鹽酸尼非卡蘭(標(biāo)準(zhǔn)品)Nifekalant hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
CL-0046C4-2(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×25--2-脫氧胞苷25克

HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系6-溴己醋 6-BroMohqxcnoic ccid;6-BroMoccproic ccid 44-70-8

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞(彝族);HYL 人腹膜內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLSILVERnitnATE肖酸銀蛋白組學(xué)級25GRT

牛腦垂體提取物BPE麗春紅2R100克2～8°C

EPHB2 Others Mouse 小鼠 EphB2 / Hek5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) POPSO 10g/100g原裝 Sigma P3405