PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：有輪瑞氏PCR檢測(cè)試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

3-Oxo-4-aza-5-alpha-androstane-17β-carboxylic acid  中文名：  分子式：C19H29NO3    鴨白介素6(IL-6)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-O-Methyl-Estrone  中文名：3-氧甲基基雌酮  分子式：C19H24O2    鴨白介素4(IL-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

3-O-Methyl-3-methoxymaxterone  中文名：3-O-甲基-3-甲氧基-5α-雄烷二醇  分子式：C21H36O3    鴨白介素1(IL-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-O-Benzyl estrone  中文名：3-O-芐基雌酚酮  分子式：C25H28O2    鴨γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-O-Acetylandrostenone hydrazone  中文名：3-O-乙酰基雄酮腙  分子式：C21H32N2O2    鴨α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
人脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  2-Benzoylbenzoic acid  85-52-9  中文名：2-苯甲酰苯甲酸  分子式：C14H10O3 

人脂蛋白α(Lp-α)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Benzothiazolyl diethyldithiocarbamate  95-30-7  中文名：二乙基二硫代氨基甲酸 2-苯并噻唑酯  分子式：C12H14N2S3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人脂蛋白aelisa試劑盒   人脂蛋白a試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人脂蛋白a試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂蛋白a試劑盒、人脂蛋白a elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  2-Benzothiazolol  934-34-9  中文名：2-羥基苯并噻唑  分子式：C7H5NOS  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人脂蛋白a（Lp-a）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  2-Benzothiazolyl diethyldithiocarbamate  中文名：二乙基二硫代氨基甲酸 2-苯并噻唑酯  分子式：C12H14N2S3  度：98.0%

人脂阿拉伯甘露聚糖elisa試劑盒   人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒、人脂阿拉伯甘露聚糖elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  2-Benzothiazolol  934-34-9  中文名：2-羥基苯并噻唑  分子式：C7H5NOS
有輪瑞氏PCR檢測(cè)試劑盒直銷S100B Others Human 人 S100B 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Berberine hydrochloride

CL-00074T1(小鼠癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2京尼平苷酸質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%Geniposidic acid

EFNA5 Others Rat 大鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 京尼平苷酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Geniposidic acid

小鼠細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL原兒茶酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品3,4-Dihydroxybenzoic acid

TM3小鼠間質(zhì)細(xì)胞 TM3 mouse Leydig cells D-MEM/F-12培養(yǎng)基(GIBCO)+5%馬血清+2.5%FBS鹽酸戊乙奎（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定Penehyclidine Hydrochloride
人皮膚鱗癌細(xì)胞;A-431 [A431]組蛋白H1(小牛胸腺)5克

PROC Others Human 人 PROC1 / Protein C / PROC 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2,6-二安基本;2,6-本二安; 2,6-二安; 2-基-1,3-本二安 2,6-DicMinotoluqnq;2-Mqthyl-1,3-phqnylqnqdicMinq;2,6-ToluqnqdicMinq;2,6-TolylqnqdicMinq;1,3-DicMino-2-Mqthylbqnzqnq;2-Mqthyl-1,3-bqnzqnqdicMinq; 83-40-2

小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(EGFP標(biāo)記)尿苷二嶙酸葡萄糖5克

3T6細(xì)胞，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 人細(xì)胞,gpc-1細(xì)胞 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg腎上腺酮1克RT

恒河猴腎細(xì)胞;RM-316373-93-62-脫氧腺苷一水合物 ≥99%2'-Deoxyadenosine monohydrate
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。