PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：血吸蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

5-Hydroxymethyl-2-furoic acid  中文名：5-羥甲基-2-糠酸  分子式：C6H6O4    細(xì)胞間粘附分子1   英文名稱(chēng)：   Human Iercellular Adhesion Molecule 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   ICAM-1

5-Formyl-2-furylboronic acid  中文名：  分子式：C5H5BO4    干擾素α受體   英文名稱(chēng)：   Human Ierferon α Receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   IFNαR

5-Formamide-1-(2-formyloxyethl)pyrazole  中文名：  分子式：C7H9N3O3    樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1   英文名稱(chēng)：   insulin-like growth factors binding protein-1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   IGFBP-1

5-Fluorouracil  中文名：  分子式：C4H3FN2O2    樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2   英文名稱(chēng)：   insulin-like growth factors binding protein-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   IGFBP-2

5'-Deoxy-5-fluorocytidine  中文名：  分子式：C9H12FN3O4    樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3   英文名稱(chēng)：   insulin-like growth factors binding protein-3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   IGFBP-3
兔促卵泡素(rabbit FSH)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C18H27N3O4  度：98.0%

兔雌二醇(rabbi E2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-Amino-1-naphthol  中文名：5-氨基-1-萘酚  分子式：C10H9NO  度：98.0%

兔超氧化物歧化酶   英文名稱(chēng)：   Rabbit Superoxide Dismase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   SOD  4-Benzoyl 4'-methyldiphenyl sulfide  中文名：4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚  分子式：C20H16OS 

兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           4-Difluoromethoxy-3-hydroxybenzaldehyde  中文名：  分子式：C8H6F2O3 

兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              5-Acetyl-3-chloro-10,11-dihydro-5H-dibenz[b,f]azepine  中文名：  分子式：C16H14ClNO
血吸蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)NRG1 Others Canine 狗 NRG1-alpha Protein (ECD) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 拉呋替丁（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Lafutidine

人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞RNAHPAF miRNA5 μg托可索侖/維生素E聚乙二醇琥珀酸酯質(zhì)量規(guī)格：VE含量≥260.00mg/g as dl-α-tocopherolTocofersolan,VE-TPGS

兔晶體上皮細(xì)胞永生系;N/N1003A(RLE) 細(xì)胞，HCT 116細(xì)胞 M-1細(xì)胞，小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化)鹽酸甲氧那明質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,CPMethoxyphenamine HCl

人胚肺細(xì)胞系;KuMA安倍生坦質(zhì)量規(guī)格：>98%Ambrisentan

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/Cambodia/R0405050/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 安倍生坦(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ambrisentan
HeLa 229 人細(xì)胞5-FAM, SE；5-羧基熒光素琥珀酯質(zhì)量規(guī)格：0.95-Carboxyfluorescein N-succinimidyl ester

EA.hy926人臍細(xì)胞融合細(xì)胞 EA.hy926 human umbilical vein cell fusion cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS5,6-FAM；5(6)-羧基熒光素質(zhì)量規(guī)格：0.955(6)-Carboxyfluorescein

TNFSF9 Protein Mouse 重組小鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (His 標(biāo)簽)5(6)-FAM, SE; 5(6)-羧基熒光素琥珀酯質(zhì)量規(guī)格：>90%5(6)-FAM, SE

大鼠條紋神經(jīng)元(RNs)(1×106) C6, 大鼠腦細(xì)胞 RattusS-腺苷-L-蛋氨酸;S-腺苷甲硫氨酸質(zhì)量規(guī)格：BR,度>96%,干品腺苷蛋氨酸>49%S-adenosyl-L-mine (SAM)

人羊膜細(xì)胞;WISH5(6)-ROX ;5(6)-羧基-X-羅丹明鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>95%,進(jìn)分5(6)-Carboxy-X- rhodamine; 5(6)-ROX
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。