技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：小孢子酒曲菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
4,5-Di-O-caffeoylquinic acid methyl ester  中文名：4,5-二咖啡酰奎寧酸甲酯  分子式：C26H26O12  度：97.5%  兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體(ANGA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Methyl chlorogenate  中文名：綠原酸甲酯  分子式：C17H20O9  度：98.0%  兔子孕激素/孕(PROG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

3,6'-Disinapoylsucrose  中文名：3,6'- 二芥子酰基蔗糖  分子式：C34H42O19  度：98.0%  兔子膠原酶II(CollagenaseII)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Triethyl   中文名：檸檬酸三乙酯  分子式：C12H20O7  度：98.0%  大鼠巨噬細(xì)胞蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

α-Lipoic acid  中文名：α-硫辛酸  分子式：C8H14O2S2  度：98.5%  兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1αelisa試劑盒   兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α試劑盒、兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。
人轉(zhuǎn)鐵蛋白（F）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  3-(4-Chlorobutyl)indole-5-carbonitrile  143612-79-7  中文名：  分子式：C13H13ClN2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  3-(4-Chlorobutyl)indole-5-carbonitrile  143612-79-7  中文名：  分子式：C13H13ClN2 

人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  3-(3-Chloropropyl)-1,3-dihydro-7,8-dimethoxy-2H-3-benzazepin-2-one  85175-59-3  中文名：  分子式：C15H18ClNO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人轉(zhuǎn)錄因子   英文名稱：   Human Engrailed-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EN-2  3-(1-Piperazinyl)-1,2-benzisothiazole  87691-87-0  中文名：  分子式：C11H13N3S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人轉(zhuǎn)錄激活因子6(ATF6)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human ATF6 (Activating anscription Factor 6) ELISA Kit  2''-O-Acetylsprengerinin C  1220707-33-4  中文名：  分子式：C46H72O17
小孢子酒曲菌PCR檢測試劑盒說明書rCF, 大鼠成纖維細(xì)胞 A4細(xì)胞 HL-7702(肝細(xì)胞)醋酸舍莫瑞林 Sermorelin Acetate質(zhì)量規(guī)格：≥98.0%

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW480 [SW 480;SW-480]磺胺嘧啶銀Silver Sulfadiazine質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP31,BR

EPHA6 Others Mouse 小鼠 EphA6 / EHK-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 磺胺嘧啶銀(標(biāo)準(zhǔn)品)Silver Sulfadiazine質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人結(jié)細(xì)胞;T84辛伐他汀 Simvastatin質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,細(xì)胞培養(yǎng)級

CD5 Others Rat 大鼠 CD5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 辛伐他汀,辛伐他丁（標(biāo)準(zhǔn)品）Simvastatin質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
VSIG8 Others Human 人 VSIG8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人參皂甙Rb3，英文名或英文縮寫：Ginsenoside Rb3，級別：BR，規(guī)格：25克

人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-26-溴-1-己1 6-Bromo-1-hqxqnq 692-47-8

大鼠細(xì)胞;IR983F 腺癌細(xì)胞，Caco-2細(xì)胞 WEHI 164細(xì)胞，鼠纖維細(xì)胞系乙二茶堿，英文名或英文縮寫：Aminophylline hydrate，級別：AR，規(guī)格：25克

GBC-SD, 人細(xì)胞 Human氫氧化shēng huà shì jì容量：25克

CD99L2 Others Mouse 小鼠 CD99L2 / MIC2L1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (2-羥基磺酸))