技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：產(chǎn)紫青霉PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
2-Amino-2',5-dichlorobenzophenone  2958-36-3  中文名：2-氨基-2',5-二氯二苯酮  分子式：C13H9Cl2NO  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

2-Allylphenol  1745-81-9  中文名：2-烯丙基酚  分子式：C9H10O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1IgA/G/M)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

2-Acetylfluorene  781-73-7  中文名：2-乙酰芴  分子式：C15H12O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2-Acetylbutyrolactone  517-23-7  中文名：2-乙酰基丁內(nèi)酯  分子式：C6H8O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2-Acetyl-6-methoxynaphthalene  3900-45-6  中文名：6-甲氧基-2-乙酰萘  分子式：C13H12O2  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
超微量Ca2+Mg2+-ATP酶測定試劑盒（比色法）                    Aurantio-obtusin  中文名：橙黃決明素  分子式：C17H14O7 

超微量ATP酶測試盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、T－ATP酶）  Withaperuvin C  81644-34-0  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  關(guān)鍵詞：  酸漿屬; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

超土壤基因組DNA快速提取試劑盒   Rapid exaction kit for genomic DNA in soil                 Panaxyne  122855-49-6  中文名：  分子式：C14H20O2 

腸道病毒EV71核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T                 3-Oxo-4-aza-5-alpha-androstane-17β-carboxylic acid  中文名：  分子式：C19H29NO3 

產(chǎn)品名稱   Serum low-density lipoprotein (LDL) test kit  Oxytetracycline   中文名：鹽酸土霉素  分子式：C22H25ClN2O9
產(chǎn)紫青霉PCR檢測試劑盒直銷大鼠角膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL氯唑沙宗質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BRChlorzoxazone

Hep3B人細(xì)胞 Hep3B human hepatocarcinoma cells DMEM+10% FBS氯唑沙宗（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Chlorzoxazone

IL18 Protein Human 重組人 IL18 / Ierleukin 18 / IGIF 蛋白 (GST 標(biāo)簽)D-氨基葡萄糖鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BRD-Glucosamine hydrochloride

NCI-H520(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 A549 [A-549](細(xì)胞)奧卡西平質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%,BROxcarbazepine

CL-0448SW 1990(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2奧卡西平（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Oxcarbazepine
MRC-5-EGFP+puro人胚 MRC-5-EGFP+puro in human embryo lung fibroblasts MEM+10%Hyclone滅活血清+2ug/ml puromycin鹽酸喹那普利（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定Quinapril hydrochloride

TNFSF13B Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 BLyS / TNFSF13B / BAFF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)愛普列特（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測定Epristeride

人角膜上皮細(xì)胞 (HcorF)( 5×105 ) 293T, SV40轉(zhuǎn)化的人胚腎上皮細(xì)胞系 Human羥苯磺酸鈣（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Calcium dobesilate

人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞;CFPAC-1異鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品Isorhamnetin 3-glucoside-7-rhamnoside

BMPR1B Others Human 人 BMPR1B / ALK-6 (149-502) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 5'-tert-Butyldimethylsilyloxy 美洛昔康質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口5'-tert-Butyldimethylsilyloxy Meloxicam