技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：豬圓環(huán)病毒1型PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
2-Fluoroadenosine  146-78-1  中文名：  分子式：C10H12FN5O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2-Deoxy-2,2-difluoro-D-erythro-pentafuranous-1-ulose-3,5-dibenzoate  122111-01-7  中文名：  分子式：C19H14F2O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)-quinolyl-3-methanol  121660-11-5  中文名：  分子式：C19H16FNO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)quinoline-3-carboxaldehyde  121660-37-5  中文名：  分子式：C19H14FNO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2   英文名稱：   maix metalloproteinase 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MMP-2

2-Cyclopropyl-3-[(diphenylphosphinyl)methyl]-4-(4-fluorophenyl)quinoline  146578-99-6  中文名：  分子式：C31H25FNOP  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-3   英文名稱：   maix metalloproteinase 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MMP-3
壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體 (AIL/APO 2L )   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Arctinol B  102054-39-7  中文名：  分子式：C13H12O2S2 

壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體   英文名稱：   tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AIL/APO 2L  Perforatumone  827319-50-6  中文名：  分子式：C35H52O5  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

壞死因子β   英文名稱：   Rat Tumor Necrosis Factor β   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TNF  β  Androst-5-ene-3β,17β-diol 3,17-diacetate  中文名：雄甾-5-烯-3β,17β-二醇 3,17-二乙酸酯  分子式：C23H34O4 

壞死因子α受體   英文名稱：   Human Tumor Necrosis Factor α Receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TNFαR  Ritonavir  155213-67-5  中文名：利托那韋  分子式：C37H48N6O5S2 

化十六烷基   100g  3-O-Benzyl estrone  中文名：3-O-芐基雌酚酮  分子式：C25H28O2  度：98.0%
豬圓環(huán)病毒1型PCR檢測試劑盒直銷TOV21G人細(xì)胞 Human ovarian cancer cell line TOV21G 1640+10FBS%蛋白酶3底物1m，熒光質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRCaspase 3 Substrate 1m(Apopain), fluorogenic; Ac-DEVD-AMC

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD)抗菌肽B;天蠶絲抗菌肽質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRCecropin B

MX-1(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腮腺細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)卡律蝎質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRCharybdotoxin

小氣道平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)促皮質(zhì)素釋放因子，綿羊質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRCorticotropin Releasing Factor,ovine

IL9 Others Human 人 IL-9 / Ierleukin-9 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 蛋白激酶C（19-36）；蛋白激酶C選擇性抑制蛋白質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRProtein Kinase C (19-36);Protein Kinase C Selective Inhibitor Protein
人肝細(xì)胞;QSG-7701 [QSG7701] 人上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLshēng huà shì jì容量：2～8℃，避光250毫克

人B細(xì)胞瘤細(xì)胞;RAMOS(RA.1)反式茴香腦 cis-cnqthol 104-46-1

人上皮細(xì)胞(HMEpiC) (5×105)環(huán)己安磺醋 Cyclcmic ccid 100-88-9

CM-H120人神經(jīng)元細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL聚山梨酯80培養(yǎng)基(真菌)shēng huà shì jì容量：500毫升

綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子細(xì)胞;U14-GFP 小鼠肝星形細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL(+)-Cellobiose