PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：致病性大腸桿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

22-Dehydroclerosteryl acetate  28594-00-5  中文名：  分子式：C31H48O2  度：93.0%  關(guān)鍵詞：  大葉桂櫻; 豆甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠琥珀酸脫氫酶elisa試劑盒   小鼠琥珀酸脫氫酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠琥珀酸脫氫酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠琥珀酸脫氫酶試劑盒、小鼠琥珀酸脫氫酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

22-Dehydroclerosterol glucoside  143815-99-0  中文名：  分子式：C35H56O6  度：%  關(guān)鍵詞：  ; 豆甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原elisa試劑盒   大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原試劑盒、大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

22-Dehydroclerosterol  26315-07-1  中文名：22-去氫赤桐甾醇  分子式：C29H46O  度：94.0%  關(guān)鍵詞：  抗菌; 豆甾烷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物elisa試劑盒   大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物試劑盒、大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

21-Deoxyneridienone B  924910-83-8  中文名：  分子式：C21H28O3  度：%  關(guān)鍵詞：  孕甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體elisa試劑盒   大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體試劑盒、大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

20-Hydroxyecdysone  5289-74-7  中文名：20-羥基蛻皮甾酮  分子式：C27H44O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  ; ; ; 蛻皮甾; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠呼腸孤病毒3型抗體（RV-3Ab）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
sVE-Cadherin   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   奧地利 Bender  Otophylloside F  中文名：青陽(yáng)參苷F  分子式：C48H76O16 

Borate,Decahydrate   500g                 4,5-Dimethoxy-1-cyanobenzocyclobutane  中文名：  分子式：C11H11NO2 

Bite   1kg  4,5-Di-O-caffeoylquinic acid methyl ester  188742-80-5  中文名：4,5-二咖啡酰奎寧酸甲酯  分子式：C26H26O12 

SOD   3KU                 Amoxicillin  中文名：阿莫西林  分子式：C16H19N3O5S 

Skimmilk   500g  Amoxicillin trihydrate  61336-70-7  中文名：羥氨芐青霉素三水合物  分子式：C16H19N3O5S
致病性大腸桿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)大鼠源細(xì)胞 Butt's 瘤細(xì)胞，NAMALWA細(xì)胞 LLC-MK2細(xì)胞，綠猴恒河猴腎細(xì)胞咪唑煙酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Imazapyr acid

Hela, 人細(xì)胞系 Human石膽酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>97(GC),標(biāo)準(zhǔn)品Lithocholic Acid

ADIPOQ Others Mouse 小鼠 ADIPOQ / ACDC / Adiponectin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 氧嗪酸鉀質(zhì)量規(guī)格：>98%Potassium Oxonate

鐵硒傳遞蛋白 100xITS氧嗪酸鉀(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Potassium Oxonate

ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 綿馬酸ABA（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Filixic acid ABA
人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-1 人胃粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL大豆分離蛋白shēng huà shì jì容量：RT50克

人滑膜細(xì)胞RNAHS miRNA5 μg2 2 4 4 5-五溴聯(lián)本迷 2,2',4,4',5-PqNTcBROMODIPHqNYL qtqr 60348-60-9

LRRN3 Others Human 人 LRRN3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 檸檬酸shēng huà shì jì容量：5克

牛胚氣管細(xì)胞;EB (NBL-4)Φ60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿shēng huà shì jì容量：2～8℃5克

A172細(xì)胞，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 ,HepG2細(xì)胞 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO 205300-87-83，5-二甲基異唑，97%3,5-Dimetxylisoxazole
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。