PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：綿羊腺病毒PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

T-108A膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL愈創(chuàng)木酚，英文名或英文縮寫：2- metxoxypxenol，級別：CP，99%，規(guī)格：250毫克

EGFR Others Mouse 小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 比卡魯安 BicclutcMidq 90327-06-2

小鼠子宮成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLγ-亞麻酸，英文名或英文縮寫：γ-Linolenic acid metxyl ester，級別：AR，99.5%，規(guī)格：1公斤

F9小鼠 F9 mouse teratoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS胰胨大豆胨固綠瓊脂shēng huà shì jì容量：100毫升

IL10 Protein Human 重組人 IL10 / Ierleukin-10 蛋白 (His 標(biāo)簽)(牛肉蛋白胨)
22RV1細(xì)胞，細(xì)胞 人細(xì)胞,Bel-7405細(xì)胞 CL-0024Anglne(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2柏醇Coniferyl alcohol質(zhì)量規(guī)格：>98%,sigma223735

中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1乙酰輔酶A鈉鹽Acetyl coenzyme A  salt  質(zhì)量規(guī)格：≥93%,美國進(jìn)口

IL1RAPL1 Others Human 人 IL1R8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 肌苷酸二鈉Di 5'-Inosinate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

細(xì)胞衰老檢測試劑盒CSA環(huán)索奈德Ciclesonide質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 環(huán)索奈德(標(biāo)準(zhǔn)品)Ciclesonide質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
綿羊腺病毒PCR檢測試劑盒直銷T/G細(xì)胞，人平滑肌細(xì)胞 KM小鼠網(wǎng)織細(xì)胞瘤株,LⅡ細(xì)胞 人真皮成纖維細(xì)胞-胎兒裂解物HDF-f L(2S)-2-N-芴甲氧羰基氨基-2-甲基-6-庚1酸(S)-N-Fmoc-2-(4'-pentenyl)alanine質(zhì)量規(guī)格：>97%

NEC(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2潑尼龍1酸鈉Prednisolone phosphate 質(zhì)量規(guī)格：>97%,USP

Caki-1(人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0046C4-2(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠單核巨噬細(xì)胞;J774A.1ABD-F[=4-(氨磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(N)(T))ABD-F [=4-(Aminosulfonyl)-7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole]質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(N)(T)

綿羊皮膚細(xì)胞;OAR-S1二茂鐵乙酸(>97.0%(GC))Ferroceneacetic Acid質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

IL13RA2 Others Canine 狗 IL13RA2 / IL13R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (肼基羰基)二茂鐵(>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記)(Hydrazinocarbonyl)ferrocene質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記
HA Others H2N2 甲型 H2N2 (A/Japan/305/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) D(+)GALACTOSED-半乳糖*白色結(jié)晶粉末RTsigma

人上皮細(xì)胞總RNAHMEpiC NA茜素黃GG Alizarin yellow GG 584-42-9 25G 通用試劑

CTSL1 Others Mouse 小鼠 CTSL / Cathepsin-L 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 馬尿醋;本酰安基醋;本酰甘安醋 Hippuric ccid;Bqnzoyl-cMino ccqtic ccid;N-Bqnzoylglycinq;Bqnzoylglycocoll 492-69-

HCT-15 人細(xì)胞MaltosemonohydrateD-(+)-麥芽糖單水合物0.1UN超，99%

CL-0401NCI-H446(人小細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×214936-97-1藍(lán)I鈉鹽XYLIDYL BLUE I wo7ium SALT
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。