改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測試劑盒說明書【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

【產(chǎn)品名稱】: 改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA)PCR
【貨號】: BKP3998
組成及試劑配制:

酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

EFNA1 Protein Human 重組人 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 標(biāo)簽)(S)-2-基-3-(4-咪唑基)，英文名或英文縮寫：L-Histidine，級別：BR，99%，規(guī)格：10克

EJ(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 肺大平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)-2，4-二硝基... -2,4-DNPH 888-54-0 1ML 標(biāo)準(zhǔn)品

間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪細(xì)胞分化培養(yǎng)基MADM-prf二茂鐵;環(huán)務(wù)二1鐵 Fqrrocqnq;Biscyclopqntcdiqnyl iron;Di-2,4-cyclopqntcdiqn-1-yl iron 10-24-2

CDCP1 Others Mouse 小鼠 CDCP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4,4'-Bipyridineγ,γ-聯(lián)1克AR，99%

大鼠完全培養(yǎng)基 100mL10034-82-9wo7ium chromate tetrahydrate
GBP1 Others Human 人 GBP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 增甘1(>97.0%(T))Glycine-N,N-bis(methylenephosphonic Acid)質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

木瓜蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mLN-甲基亞氨二乙酸(>98.0%(GC)(T))N-Methyliminodiacetic Acid質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)

PC9-EGFP-puro(慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人細(xì)胞 PC9-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in human lung cancer cells DMEM+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin氮基三乙酸二鈉鹽(>99.0%(T))Nitrilotriacetic Acid Di Salt質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(T)

IL32 Protein Human 重組人 Ierleukin-32 / IL-32 蛋白 (isoform alpha, His 標(biāo)簽)N-(2-羧乙基)亞氨基二乙酸(>98.0%(T))N-(2-Carboxyethyl)iminodiacetic Acid質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

人平滑肌細(xì)胞(HCSMC)(5×105 ) RLF, 大鼠成纖維細(xì)胞 Rattus三乙四胺-N,N,N',N'',N''',N'''-六乙酸(>98.0%(T))Triethylenetetramine-N,N,N',N'',N''',N'''-hexaacetic Acid質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)
SELE Others Rat 大鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 蛋白酶K(進(jìn)分)Proteinase K質(zhì)量規(guī)格：≥30units/mg protein,sigma分裝

CM-H025人胰腺上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL蛋白酶K(Sigma)Proteinase K質(zhì)量規(guī)格：≥30units/mg protein,sigma原裝

HuTu-80細(xì)胞，人十二指腸腺癌細(xì)胞 人色素瘤細(xì)胞,HME2細(xì)胞 人肝永生化細(xì)胞;THLE-3胰凝乳蛋白酶抑制劑Chymostatin質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)分

H9c2(2-1) (大鼠心肌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2亮抑蛋白酶肽(進(jìn)口)Leupeptin 質(zhì)量規(guī)格：≥95%,進(jìn)口半硫酸鹽

CD80 Others Human 人 B7-1 / CD80 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制劑Pepstatin A microbial質(zhì)量規(guī)格：≥90%,進(jìn)分
改良安卡拉痘苗病毒PCR檢測試劑盒說明書人平滑肌細(xì)胞裂解物HCSMCL肌酸，英文名或英文縮寫：Creatine Monohydrate，級別：BR，99%，規(guī)格：25克

AMTN Others Human 人 AMTN / Amelotin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1.2- 1,2-BUTcNqDIOL 284-03-

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-Swiss albino三氧化鉬 Molybdqnum trioxidq 1313-7-2

tTA基因修飾的小鼠(B類);P19-CAG-tTA-1F3 彈性蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL5-嶙酸吡哆醛，英文名或英文縮寫：PLP，級別：IND，規(guī)格：5克

A549, 人細(xì)胞系 HumanEC肉湯EC BROTH FOR MICROBIOLOGY

PCR檢測試劑盒

 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。