PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優勢：
1. 特異性：同豬嵴病毒梅拉哥病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

人浸潤性導管癌旁皮膚細胞;CCD-1095SkTESBUFFERTES試劑級500G7365-44-8RT

Caki-1細胞，人腎透明細胞癌細胞 綠猴猴脈絡膜-視網膜(內皮)細胞,RF/6A細胞 CL-0414PC-3M-IE8(人高轉移細胞株)5×106cells/瓶×2茴香腦 cnqtholq (cS) 4180/3/8

CRT(人神經細胞) 5×106cells/瓶×2nitnofurantoin硝呋妥因10克超，99%

hMNC-PB-c pooledula-pure 人單核細胞，來自外周血，混合來源，超 人微內皮細胞HCMEC復合基酸粉250毫克

GBC-SD, 人細胞apo-Transferrin 25mg/100mg/500mg原裝 Sigma T4382
HB611(人細胞) 5×106cells/瓶×2 成纖維細胞培養基FM十二水合硫酸鐵銨(>98%,BR)Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate質量規格：>98%,BR

腎系膜細胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)鉬酸銨四水Ammonium molybdate, tetrahydrate質量規格：>98%,BR

ADRBK1 Others Human 人 GRK2 / ADRBK1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 1鉬酸銨(>96.5%,BR)Ammonium phosphomolybdate , hydrate質量規格：>96.5%,BR

雜交瘤(B類);Z153A2A5B3A121酸氫銨鈉(>98%,BR)Ammonium  phosphate質量規格：>98%,BR

HUVEC細胞，人臍內皮細胞 人肝細胞正常,HL-7702細胞 CL-0072Daudi(人瘤細胞)5×106cells/瓶×2丁二酸銨(>98%,BR)Ammonium succinate質量規格：>98%,BR
同豬嵴病毒梅拉哥病毒PCR檢測試劑盒說明書HS 683(人腦細胞) 5×106cells/瓶×2 生孢梭菌肌苷-5'-三1酸三鈉鹽ITP?Na3質量規格：>95%,BR

滑膜細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鳥苷-5'-三1酸二鈉鹽GTP.Na2質量規格：>95%,BR

CNDP2 Others Mouse 小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 4,4'-二正辛氧基氧化偶氮苯(>95.0%(N))4,4'-Di-n-octyloxyazoxybenzene質量規格：>95.0%(N)

人髓母細胞瘤細胞;Daoy4,4'-二壬氧基氧化偶氮苯4,4'-Dinonyloxyazoxybenzene質量規格：

HMy2.CIR細胞，人B母細胞 人細胞,H7402細胞 CL-0200RWPE1(人上皮細胞)5×106cells/瓶×24'-(反-4-戊基環己基)二苯基-4-甲腈(>98.0%(GC))4'-(trans-4-Amylcyclohexyl)biphenyl-4-carbonitrile質量規格：>98.0%(GC)
PRLR Others Human 人 PRLR / Prolactin Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) 3,4-二羥基本酸100毫克

人內根殼細胞總RNAHHIRSC NA對基-α-D-吡... 4-Nitrophenyl α-D-galactopyranoside 7493-95-0 100MG 通用試劑

VEGFA Others Rat 大鼠 VEGF164 / VEGFA 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 1 JP-TS cVIcTION FUqL 6474-47-8

中國倉鼠卵巢細胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr-偶氮脒類引發劑V401克2～8℃

NCI-H460[H460]細胞，大細胞細胞 人,H4細胞 小鼠B細胞雜交瘤細胞;W6/322，4-二硝基扶本(劇毒)(陰涼)2,4-fluorobenzene
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。