【產(chǎn)品名稱】: 馬立克氏病病毒3型PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Marek's Disease Virus(MDV)3PCR
【貨號】: BKP3974

【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；
u 運(yùn)輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制

酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

馬立克氏病病毒3型PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞;293Two7iumCHLORIDE錄化鈉*白色精細(xì)顆粒粉末RTsigma

豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL3 中國倉鼠肺細(xì)胞，CHL/IU[CHL-11]細(xì)胞 C3H 10T1/2 2A6細(xì)胞，小鼠成纖維細(xì)胞1,2-醌-4-磺醋內(nèi);β-醌-4-磺醋內(nèi) 1,2-Ncphthoinoneonq-4-sulfonic ccid wo7ium sclt;wo7ium 1,2-ncphthoinoneonq-4-sulfonctq;β-Ncphthoinoneonq-4-sulfonic ccid wo7ium sclt;3,4-Dixy7no-3,4-dioxo-1-ncphclqnq sulfonic ccid wo7ium sclt 1921/4/4

人胚胎，皮膚，肌肉;M-7半固體瓊脂 Motility Tqst Mqdium(Sqmisolid)

HA Others H13N8 甲型 H13N8 (A/black-headed gull/Netherlands/1/00) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 二乙酸熒光素，英文名或英文縮寫：FDA，級別：BR，98%，規(guī)格：100克

HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系2521-86-0D-環(huán)戊基甘酸D-Cyclopentylglycine
HDBEC-c adult 人類皮膚血內(nèi)皮細(xì)胞(HDBEC)來自成年捐獻(xiàn)者 500,000cells 角膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)溴酚紅鈉Bromophenol red,  salt質(zhì)量規(guī)格：>80%,Ind Grade

食管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)硬脂酸丁酯(>98%，BR)Butyl stearate質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR

EPHA3 Others Mouse 小鼠 EphA3 (aa 569-984) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) C10E6，10%溶液C10E6質(zhì)量規(guī)格：BR

tTA基因修飾的小鼠(B類);P19-CAG-tTA-1F3C12E10，10%溶液C12E10質(zhì)量規(guī)格：BR

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A 細(xì)胞，LLC Lewis細(xì)胞 PCK細(xì)胞，大黃魚腎細(xì)胞C12E9, 10%溶液C12E9質(zhì)量規(guī)格：BR
PLAUR Others Mouse 小鼠 uPAR / PLAUR / CD87 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4'-戊基苯乙酮(>95.0%(GC))4'-Pentylacetophenone質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

家貓肺細(xì)胞;FCA-L24-(反-4-丙基環(huán)己基)苯腈(>98.0%(GC))4-(trans-4-Propylcyclohexyl)benzonitrile質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S2 (aa 726-1296) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4-磺酰杯[4]芳烴水合物(>94.0%(T))4-Sulfocalix[4]arene Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>94.0%(T)

腦內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)4-磺酰杯[6]芳烴水和物(>95.0%(HPLC))4-Sulfocalix[6]arene Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)

HUVEC, 人臍內(nèi)皮細(xì)胞 人上皮性細(xì)胞，TOV-112D細(xì)胞 RH-35(細(xì)胞)4-磺酸杯[8]芳烴水合物(>98.0%(HPLC)(T))4-Sulfocalix[8]arene Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)
馬立克氏病病毒3型PCR檢測試劑盒說明書CL-0086GNM(人口腔鱗癌頸結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2WATER,STERILE,NUCLEASE-FREE無菌水(無核酸酶,DEPC處理過)生物技術(shù)級透明無色液體RTsigma

NRK-52E，大鼠腎細(xì)胞酚試劑 3-Mqthyl-2-bqnzothiczolinonq hydrczonq xy7nochloridq monohydrctq 38894-11-0

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KM932 人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLURIDINE-5'-TRIPHOSPHATE5'-三嶙酸尿苷三鈉超級白色粉末FROZENsigma

人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞RNAHCPEC miRNA5 μgHISTOCHOICEMOUNTINGMEDIA封組織學(xué)級無色至微黃液體RTsigma

IL23 Others Marmoset 狨猴 IL23A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 9003-53-6聚本 500Polystyrene
PCR檢測試劑盒

馬立克氏病病毒3型PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。