【產(chǎn)品名稱】: 諾如病毒通用PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Norwalk Viruses(NV)RTPCR
【貨號】: BKP4102

【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

諾如病毒通用PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

AIMP1 Protein Mouse 重組小鼠 AIMP1 / EMAP2 / SCYE1 蛋白本甲酰三扶shēng huà shì jì容量：RT1克

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)(5×105) U266B1 [U266], 人細(xì)胞 Human井岡霉素 Validamycin 37248-47-8 5G 通用試劑

大鼠背脊髓神經(jīng)元RN-dsc輕拂醋;拂輕醋 xy7nofluoric ccid

CD1B & B2M Others Human 人 CD1B & B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Tyrosinedecarboxylase酪酸脫羧酶25克BR，2500～7000u/mg，豬血

獼猴肌肉細(xì)胞;MMm7109-72-8丁基n-Butyllitxium
BPIFA2 Others Human 人 BPIFA2 / C20orf70 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 物質(zhì)P（1-9）Substance P (1-9)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人食管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL物質(zhì)P（7-11）Substance P (7-11)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

7WML6.0細(xì)胞，人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株 生孢梭菌 狗肺成纖維樣細(xì)胞;DogL1TA-0910，他替瑞林TA-0910, taltirelin質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PPBP Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)素，游離酸TRH, Free Acid質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

NRK-52E(大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 APCDD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 尿皮質(zhì)激素Ⅲ，小鼠Urocortin III, mouse質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
IGSF3 Others Human 人 IGSF3 / EWI-3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 25-脫乙?；Ｆ?/span>25-Desacetyl Rifampicin質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

NCI-H1395 人L-纈氨酰胺鹽酸鹽L-Valinamide hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Raw264.7, 小鼠單核巨噬細(xì)胞細(xì)胞半胱胺鹽酸鹽Cysteamine Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

LGALS1 Protein Human 重組人 Galectin-1 / LGALS1 蛋白甘氨酰胺鹽酸鹽Glycinamide hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：0.98

人肝細(xì)胞;QSG-7701 [QSG7701] 人上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLL-羥脯氨酸甲酯鹽酸鹽L-4-Hydroxyproline methyl ester hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
諾如病毒通用PCR檢測試劑盒說明書DU 145(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×24-本酚，英文名或英文縮寫：4-Iodopxenol，級別：AR，99.5%，規(guī)格：5克

CA12 Others Mouse 小鼠 Ca12 / Car12 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 啉 Morpholine,≥99.0%  100ML 通用試劑

人細(xì)胞;SF17L-環(huán)務(wù)基甘安醋 L-CYCLOPqNTYL GLYCINq 21-84-8

人臍帶間葉干細(xì)胞(臍帶)(HUMSC) (5×105)本酚紅鈉鹽100克

CM-R008大鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL83-46-5β-谷甾醇(含菜油甾醇)beta-Sitosterol
PCR檢測試劑盒

諾如病毒通用PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。