PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：超級細菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

NCI-H2452(人間皮瘤細胞) 5×106cells/瓶×2球蛋白抗原雞IgGshēng huà shì jì容量：RT50片/盒

CCL-149(大鼠肺泡上皮細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0086GNM(人口腔鱗癌頸結轉(zhuǎn)移癌細胞)5×106cells/瓶×2 小鼠Lewis瘤株;LLT2,5-二肖基本酚(加約20%水濕潤,本品干重約為5g) 2,5-PHqNOL 39-71-2

斑馬魚尾鰭細胞;AB.92-羥基-4-甲氧基，英文名或英文縮寫：4-metxoxysalicylaldehyde，級別：BR，規(guī)格：50克

IL12B Others Mouse 小鼠 IL12B / IL-12B 人細胞裂解液 (陽性對照) 鎳片shēng huà shì jì容量：RT10克

Hep 3B 人細胞103-81-12-本乙酰胺2-pxenylacetamide
CD3D Others Cynomolgus 食蟹猴 CD3d / CD3 delta 人細胞裂解液 (陽性對照) 酸棗仁皂苷D(標準品)Jujuboside D質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

大鼠管內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL偽原薯蕷皂苷Pseduoprotodioscin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

HCC-LM3人細胞 HCC-LM3 human hepatocarcinoma cells DMEM+10%FBS氧化芍藥苷,羥基芍藥苷(標準品)Oxypaeoniflorin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

LRIG1 Protein Mouse 重組小鼠 LRIG1 / LIG-1 蛋白 (His 標簽)3-異倒捻子素3-isomangostin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

SW1116(人腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小腸隱窩上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)柚皮苷二氫查爾酮Naringin dihydrochalcone質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
超級細菌PCR檢測試劑盒說明書EPCAM Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細胞裂解液 (陽性對照) D-叔亮氨酸鹽酸鹽D-tert-Leucine hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：BR，98.5%

人卵巢;PA-1DTAC；十二烷基三甲基氯化銨Dodecyltrimethylammonium chloride(DTAC)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

貓腎細胞;F81 EB病毒轉(zhuǎn)化的B細胞，CGM1細胞 CCC-SMC-2細胞，兔主動脈平滑肌細胞CTAC;十六烷基三甲基氯化銨CTAC質(zhì)量規(guī)格：>99%

人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細胞;NK-92MI [NK92MI]十八烷基三甲基氯化銨Stearyl Trimethyl Ammoium Chloride(STAC)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

CD244 Others Human 人 2B4 / SLAMF / CD244 人細胞裂解液 (陽性對照) 十烷基三甲基氯化銨Decyltrimethylammonium chloride質(zhì)量規(guī)格：>99%
人胚肺二倍體細胞;KMB-17wo7iumFORMATE酸鈉*白色粉末RTsigma

HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 燦爛綠;亮綠;減性亮綠;鹽沙綠 Brillicnt grqqn;DicMond grqqn G;qMqrcld grqqn crystcl;Mclcchitq grqqn G;C.I. 42040 633-03-4

CL-0306SMC-1(人胸膜瘤細胞)5×106cells/瓶×2二青 FF Xylene Cyanol FF (for molecular biolog... 2650-17-1 1G 染色劑

A673細胞，橫紋肌癌細胞 人巨核細胞保細胞,Dami細胞 人惡性多發(fā)性;ERA-2D--TagatoseD-塔格糖250毫克BR，牡蠣提取

293T(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2L-Mine 25g/100g/250g/Sigma5g 國產(chǎn)
反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。