PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優勢：
1. 特異性：馬爾太蟲通用PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

白鰱尾鰭細胞系;SCF6-芐基嘌呤shēng huà shì jì容量：RT5克

CD302 Others Rat 大鼠 CD302 / CLEC13A 人細胞裂解液 (陽性對照) 錄化-4-(三拂氧基)本磺酰錄98% 4-(Trifluoromqthoxy)bqnzqnqsulfonyl chloridq 94108-26-

Balb/c小鼠骨髓間質干細胞 Balb/c mouse bone marrow mesenchymal stem cells4,7-二本基-1,10-啰啉shēng huà shì jì容量：RT500克

B16細胞，人色素瘤細胞 植物乳桿菌 白介素-2轉染耐VP16絨癌細胞;JEG-3/VP16-IL-2Oxalaceticacid草酰乙酸5克BR

ANGPTL1 Protein Canine 重組狗 ANGPTL1 / Angiopoietin-like 1 蛋白 (Fc 標簽)104-76-72-乙基2-etxylhexan-1-ol;2-etxylhexyl alcohol
HCCC-9810人膽管細胞型細胞 HCCC-9810 human cholangiocarcinoma cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS酸棗仁皂苷B1(標準品)Jujuboside B1質量規格：HPLC≥98%，標準品

TGFB1 Protein Human 重組人 Late TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白 (His 標簽)薯蕷皂苷AProsapogenin A質量規格：HPLC≥98%，標準品

人髓核細胞(HNPC)(5×105) NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系 MouseRocilinostat (ACY-1215)ACY1215質量規格：>98%,選擇性組蛋白脫乙酰酶(HDAC6)抑制劑

小鼠肺腺癌低轉移細胞(VAP33-GFP融合蛋白穩定過表達);LA1-VAP33-GFP肉豆蔻酸,十四烷酸(標準品)Myristic acid質量規格：GC≥98%，標準品

TNFRSF13C Others Rat 大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 人細胞裂解液 (陽性對照) 肉豆蔻酸,十四烷酸Myristic acid質量規格：≥98%，BR
馬爾太蟲通用PCR檢測試劑盒直銷LL-PK1細胞，豬腎細胞 人細胞,A2780細胞 人表皮角質細胞-裂解物HEK-a LDL-天冬酰胺，一水DL-Asparagine monohydrate質量規格：>99%

非洲綠猴腎細胞;VERODL-乳酸(USP)DL-Lactic acid質量規格：88~92%，USP

IGFBP4 Others Mouse 小鼠 IGFBP4 人細胞裂解液 (陽性對照) 檸檬酸三銨Ammonium , tribasic質量規格：> 98%,AR

牛陀螺狀細胞;BT鉻天青S(Ind Grade)CAS, Chrome azurol S質量規格：Ind Grade

MSR1 Others Rat 大鼠 MSR1 / SCARA1 人細胞裂解液 (陽性對照) 5'-三1酸胞苷二鈉鹽Cytidine-5'-triphosphate (CTP), di salt質量規格：>98%,分子生物學級
Tca-8113人舌鱗癌細胞 Tca-8113 human tongue squamous cell carcinoma 1640+10% FBS酸性紅92，英文名或英文縮寫：Phloxine B，級別：超，規格：100克

IL11RA Protein Canine 重組狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白 (His 標簽)4.4’異亞炳基聯本酚，99+% Bisphqnol c 1980-2-7

NCI-H2452(人間皮瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 L1210(細胞)錄代十六烷基，英文名或英文縮寫：Hexadecylpyridinium chloride，級別：IND，規格：1公斤

人腦膜細胞總RNAHMC NA鈦酸四異酯shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光10毫克

CN1 Others Mouse 小鼠 Coactin 1 / CN1 人細胞裂解液 (陽性對照) 2.6-二甲基本酚2,6-Dimetxylpxenol
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。