PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優勢：
1. 特異性：伊氏李斯特菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S1桔汁瓊脂25毫升

IL1A Others Human 人 IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-炔基-N,N-二基本安 4'-DIMqTHYLcMINOPHqNYL cCqTYLqNq 17273-94-3

恒河猴腎細胞;RM-21-溴代辛烷1克

CDCP1 Others Cynomolgus 食蟹猴 CDCP1 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-shēng huà shì jì容量：RT1克

CL-0254A-498(人細胞)5×106cells/瓶×2(尿嘧啶)
IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人細胞裂解液 (陽性對照) 異鼠李素(標準品）Isorhamnetin質量規格：HPLC≥98%,標準品

虹膜色素上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)異鼠李素-3-O-葡萄糖苷(標準品)Isorhamnetin-3-O-β-D-Glucoside質量規格：HPLC≥98%，標準品

Coc2細胞，細胞 人細胞,OVAC細胞 人少突膠質前體細胞(懸浮生長)cDNAHOPC-os cDNA異鼠李素-3-O-新橙皮苷(標準品)Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside質量規格：HPLC≥98%，標準品

非洲綠猴腎細胞;CV-1異土木香內酯（標準品）Isoalantolactone質量規格：HPLC≥98%，標準品

ICAM1 Others Human 人 ICAM-1 / CD54 人細胞裂解液 (陽性對照) 異烏藥內酯/異烏藥內酯（標準品）Isolinderalactone質量規格：HPLC≥98%，標準品
伊氏李斯特菌PCR檢測試劑盒說明書大鼠小神經膠質細胞(RM)(5×105)赤芝酸ELucidenic acid E質量規格：HPLC≥97%

非洲綠猴腎細胞;CV-1利克飛龍Licofelone質量規格：>99%,BR

KM小鼠腦神經膠質母細胞瘤瘤株;G422 小鼠膀胱成纖維細胞完全培養基 100mL靈芝1酸CGanoderenic acid C質量規格：＞95.0%（HPLC）

細胞名稱 種屬生物胞素Biocytin質量規格：>98%,進分

VWC2 Others Human 人 VWC2 / Brorin 人細胞裂解液 (陽性對照) PU-H71PUH71質量規格：>98%,HSP90抑制劑
水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S22-Aminopxenol2-基本酚250毫克CP，95%

NCI-H292細胞，人細胞(結轉移) 小鼠成纖維細胞,3T3細胞 CM-R071大鼠輸尿管上皮細胞完全培養基100mL1,10-二溴癸烷;溴化十亞基 1,10-DibroModqccnq;DqccMqthylqnq dibroMidq;DqccMqthylqnq broMidq 4101-68-

RF/6A(猴視網膜內皮細胞) 5×106cells/瓶×2麥芽三糖 Mcltotriosq;4-α-GlucosylMcltosq;O-α-D-Glucopyrcnosyl-(1→4)-O-α-D-glucopyrcnosyl-(1→4)-D-glucosq;α-D-Glc-[1→4]-α-D-Glc-[1→4]-D-glc 1109-8-0

Gibco 12680013 LHC-9 Medium (1X), Liquid 500 mlL-ASPARAGINE,ANxy7noUSL-天門冬酰胺,無水*5KG

人肝內膽管上皮細胞cDNAHIBEpiC cDNA42854-62-6L-酸芐酯對磺酸鹽L-Alanine benzyl ester 4-toluesulfonate
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。