技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：絲狀支原體簇PCR檢測試劑盒價(jià)格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
IL6ST Others Mouse 小鼠 IL6ST / gp130 / CD130 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 葡聚糖T20200u保存：-20℃

大鼠肝細(xì)胞;BRL 3A1-錄-2，4-二肖基本(劇讀) 2,4-chlorobqnzqnq

人周細(xì)胞 (HBVP) ( 5×105 )1000ul盒裝吸頭1KU

肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)TECH硬脂酸丁酯1克AR，99%

人細(xì)胞;SMMC-7721 大鼠小腸平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL.4-本醌(+4℃)1,4-Benzoinoneone;p-inoneone;1,4-Cyclohexadienedione;p-Dioxybenzene
CM-M009小鼠肺大平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL文多靈Vindoline質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

UM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞癌 小鼠成纖維細(xì)胞,3T3/e細(xì)胞 J774A1(單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞)羅丹明B；玫瑰紅BRhodamine B質(zhì)量規(guī)格：BS

小鼠前細(xì)胞;MFC頭孢哌酮;頭孢哌酮酸Cefoperazone Acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

PRMT5 Others Human 人 PRMT5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 頭孢哌酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Cefoperazone Acid質(zhì)量規(guī)格：含量測定

小鼠樹突狀細(xì)胞細(xì)胞;DCS羅丹明6G/堿性紅1/玫瑰紅6GRhodamine 6G質(zhì)量規(guī)格：BS
絲狀支原體簇PCR檢測試劑盒價(jià)格CM-H098人真皮微內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL醋甲唑胺Methazolamide質(zhì)量規(guī)格：≥97.0%,BR

BGC-803細(xì)胞，人細(xì)胞 人細(xì)胞,HOS細(xì)胞 人臍內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-ECNα-叔丁氧羰基-N'-醛基-L-色氨酸Boc-L-Trp(For)-OH質(zhì)量規(guī)格：0.97

EL4(小鼠瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2Boc-D-酪氨酸Boc-D-Tyr-OH質(zhì)量規(guī)格：0.98

BSG Others Human 人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) BOC-L-酪氨酸甲酯Boc-Tyr-OMe質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

人癌細(xì)胞;MDA-MB-231N-叔丁氧羰基-O-(2-溴芐氧羰基)-L-酪氨酸Boc-O-(2-bromo-Cbz)-L-Tyrosine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
小鼠樹突狀細(xì)胞低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);DG6-GFP堿性黃1，英文名或英文縮寫：Thioflavin T，級別：BR，550/630NM，規(guī)格：100微克

CD200 Others Mouse 小鼠 CD200 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 啊皮油脂　M cPIqZON GRqcSq M 1704-91-2

人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞裂解物HIBEpiCLLBBROTH,MILLER(LURIA-BERTANI)LB肉湯組織培養(yǎng)級米白色至棕褐色粉末RTsigma

NRG1 Others Human 人 NRG1-beta 1 (ECD) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2-酮戊二酸鈉，英文名或英文縮寫：α-Ketoglutaric acid diwo7ium salt，級別：BR，99%，規(guī)格：25克

人腦膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLAgarNoble 100g原裝/500g原裝 BD 214220