PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：牛分支桿菌卡介苗PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

IFNA13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNA13 / Ierferon alpha-13 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)Cholesterolesterase膽甾醇酯酶(豬胰)500克BR，800u/mg

J774A.1(小鼠單核巨噬細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 空腸彎曲桿菌亞麻酸 Methyl linolenate,≥99% 301-00-8 100MG 通用試劑

組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml4-羌基磺醋 HqPqS,1M SOLUTION 7362-42-9

EGFL7 Others Human 人 EGFL7 / VE-statin 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) TBSBUFFER,20XLIQUIDTBS緩沖液 20X 濃縮液超級(jí)4LRT

人低分化;GLC-82 [GLC82](a-環(huán)狀糊精)
EFNB2 Others Rat 大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸平陽(yáng)霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）Bleomycin A5 Hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：HPLC含量測(cè)定

大鼠皮下脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL琥乙紅霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）Erythromycin ethylsuccinate質(zhì)量規(guī)格：雜質(zhì)檢查

FRhK-4恒河猴胚腎細(xì)胞 FRhK-4 Ganges RIver monkey embryo kidney cell DMEM培養(yǎng)基+10%FBS灰黃霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）Griseofulvin質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

IFNA1 Protein Rat 重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)Tivantinib(ARQ197)Tivantinib, ARQ 197質(zhì)量規(guī)格：>98%，c-Met抑制劑

MCF 7B(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 BHK(幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞)3-乙氧基－4－羥基苯（標(biāo)準(zhǔn)品）Ethyl vanillin質(zhì)量規(guī)格：系統(tǒng)適應(yīng)性
牛分支桿菌卡介苗PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)ENPEP Others Mouse 小鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸苯達(dá)莫司?。?biāo)準(zhǔn)品）Bendamustine HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CL-0310VE(人內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2澳洲茄邊堿（標(biāo)準(zhǔn)品）Solamargine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品

RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 人單核細(xì)胞型瘤，THP1細(xì)胞 GC-2spd(ts)(小鼠精母細(xì)胞)澳洲茄堿（標(biāo)準(zhǔn)品）Solasonine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥94.50%,標(biāo)準(zhǔn)品

綠色熒光蛋白標(biāo)記人細(xì)胞;MGC803-GFP安格洛苷 C（標(biāo)準(zhǔn)品）Angoroside C質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

EPCAM Others Human 人 EpCAM / OP1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 托瑞米芬Toremifene 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
hMoCD14+-PB-c single donorpre-screened 外周血來(lái)源的人類CD14+單核細(xì)胞，單一來(lái)源，預(yù)選型 10 million 人結(jié)膜成纖維細(xì)胞HConF4'-庚基苯乙酮(>96.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)4'-Heptylacetophenone

人眼球脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞HOCF4'-正辛基苯乙酮(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)4'-n-Octylacetophenone

SIRPG Others Cynomolgus 食蟹猴 SIRPG / SIRP gamma / CD172g 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 4'-戊基苯乙酮(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)4'-Pentylacetophenone

非洲綠猴腎細(xì)胞;CV-14-(反-4-丙基環(huán)己基)苯腈(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)4-(trans-4-Propylcyclohexyl)benzonitrile

NCI-H1975細(xì)胞，人非小細(xì)胞 鼠肝星形細(xì)胞,HSC-T6細(xì)胞 CM-R047大鼠腸微細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL4-磺酰杯[4]芳烴水合物(>94.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>94.0%(T)4-Sulfocalix[4]arene Hydrate
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。