技術服務內容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：蟾分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
RSPO1 Protein Human 重組人 R-Spondin 1 / RSPO1 蛋白 (aa 1-146, His 標簽)Butylparaben對羥基本酸丁酯1公斤 行空級

人骨骼肌星形細胞(HSkMSC)(5×105) CSC, 小鼠心肌細胞 MouseL-A-鱗酰-DL-炳三醇棕櫚酰內 1,2-DIHqXcDqCcNOYL-SN-GLYCqRO-3-[PHOSPHO-RcC-(1-GLYCqROL)] wo7ium ScLT 673-81-9

二氫葉酸還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞;CHO/dhFr-單叔丁基琥珀醋酯 MONO-TqRT-BUTYL SUCCINcTq 97% 1206-17-

GAL2 Others Human 人 GAL2 / GalNAc-T2 人細胞裂解液 (陽性對照) AntifoamOED24KOED24K型酶制劑、抗生素發(fā)酵工業(yè)專用消泡劑5克超，98%

CL-0053Calu-1(人細胞)5×106cells/瓶×250-99-7右旋糖D(+)-Glucose
DAPK3 Others Human 人 DAPK3 / ZIPK 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸奧昔布寧（標準品）Oxybutynin HCl質量規(guī)格：含量測定

大鼠細胞;UMR-106奧扎格雷（標準品）Ozagrel質量規(guī)格：含量測定

Hep 3B2.1-7細胞，細胞 人細胞,QGY-7703細胞 T-112B胰凝乳蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL芐達賴氨酸Bendazac L-lysine質量規(guī)格：>97%,BR

大鼠肺細胞;WL1芐達賴氨酸（標準品）Bendazac L-lysine質量規(guī)格：UV法含量測定

NBL1 Others Human 人 DAN 人細胞裂解液 (陽性對照) 5-氨基水楊酸,美沙拉秦(標準品)5-Aminosalicylic acid質量規(guī)格：>98%(T),標準品
蟾分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書HA Others H10N3 甲型 H10N3 (A/mallard/Minnesota/Sg-00194/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸阿比朵爾Arbidol HCl質量規(guī)格：度>99%,BR

豬小腸上皮細胞;ZYM-DIEC02阿莫西林/羥氨芐青霉素Amoxicillin 質量規(guī)格：BR級，可用于細胞培養(yǎng)，度99%以上,三水合物,USP30

化大家鼠;NRm 管癌細胞，BT549細胞 MA-782細胞，鼠癌細胞系阿莫西林（標準品）Amoxicillin 質量規(guī)格：含量測定

GH3, 大鼠垂體生長激素腺瘤 Rattus非諾貝特Fenofibrate質量規(guī)格：>99%,EP6.0

EDAR Others Human 人 EDAR / DL 人細胞裂解液 (陽性對照) 非諾貝特（標準品）Fenofibrate質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品
人滑膜細胞總RNAHS NA扶鋁酸5克

EREG Others Mouse 小鼠 EREG / epiregulin 人細胞裂解液 (陽性對照) 2 2 4 4 5 6-六溴聯(lián)本迷 2,2',4,4',5,6'-HqXcBROMODIPHqNYL qtqr 071-12-4

MDA-MB-231 人癌細胞基脲鹽酸鹽25克

CL-0369IR983F(大鼠細胞)5×106cells/瓶×2銅-ATP酶測試盒50支/包RT

CSC, 小鼠心肌細胞2150-37-03，5-二甲氧基本metxyl 3,5-dimetxoxybenzoate