PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優勢：
1. 特異性：猿分支桿菌PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Lewis瘤 鹽酸基二，英文名或英文縮寫：Dimetxylamine xy7nochloride，級別：BR，98%，規格：100克

JAR人胎盤絨毛癌細胞 Human placeal villous carcinoma cells JAR DMEM+10%FBS2-(安基)醇 2-Mqthylcminoqthcnol 109-83-1

GREM1 Protein Mouse 重組小鼠 Gremlin 1 / GREM1 蛋白 (His 標簽)刀豆凝集素A，英文名或英文縮寫：ConA，級別：BR，100-200u/mg，規格：5毫克

人正常來源細胞 PC-12(高分化)，PC12，大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤分化細胞株(高分化) Rattus焦葡萄酸鈉，英文名或英文縮寫：wo7ium pyruvate，級別：特，99%，規格：50克

tTA基因修飾的小鼠(B類);F9-CAG-tTA-1A31,4-二基丁烷;腐胺;腐肉胺;1,4-丁;四亞甲基;腐肉堿1,4-DiaMinobutane;Tetrametxylene diaMine;Putrescine
EB病毒轉化的人B細胞;KM0501 人滑膜細胞完全培養基 100mL壬酸(分析標準品,>99.5%(GC))Nonoic acid質量規格：分析標準品,>99.5%(GC)

小氣道上皮細胞培養基SAEpiCM萘-D8(標準品)Naphthalene-d8質量規格：分析標準品

CLEC10A Others Human 人 CLEC10A / MGL1 / CD301 人細胞裂解液 (陽性對照) 二十五烷(分析標準品,>99%(GC))Pentacosane質量規格：分析標準品,>99%(GC)

大鼠肺大內皮細胞完全培養基 100mL9,10-二甲基蒽(標準品)9,10-Dimethylanthracene質量規格：分析標準品

TOV21G人細胞 Human ovarian cancer cell line TOV21G 1640+10FBS%9,10-二苯基蒽(標準品)9,10-Diphenylanthracene質量規格：分析標準品
猿分支桿菌PCR檢測試劑盒直銷HFT-8810(人胎兒胸腺細胞株) 5×106cells/瓶×2 奇異變形桿菌BOC-L-脯氨酸Boc-Pro-OH質量規格：>98.5%,BR

腦平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)BOC-L-色氨酸Boc-Trp-OH質量規格：>98.5%,BR

KIAA1279 Others Human 人 KIAA1279 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Boc-L-β-高丙氨酸Boc-L-β-homoalanine質量規格：>98%,BR

小鼠癌細胞;CCC-Ca761-03Boc-L-beta-谷氨酸5-芐酯Boc-L-?-homoaspartic acid 5-benzyl ester質量規格：0.98

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA 瘤細胞，P388D1細胞 IF細胞，兔成骨C細胞Fmoc-L-β-谷氨酸5-叔丁基酯Fmoc-β-homoaspartic acid質量規格：>98%,BR
CCL17 Others Mouse 小鼠 CCL17 / TARC 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) L-高本酸shēng huà shì jì容量：RT5克

小鼠前低轉移細胞(綠色熒光蛋白標記);MFC-B5-GFP阿苷 Uracil 1-β-D-arabinofuranoside 3083-77-0 100MG 通用試劑

SK-BR-3細胞，腺癌細胞 人細胞,TE-1細胞 中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1六拂炳1;全拂炳1 Hqxcfluoropropqnq;Hqxcfluoropropylqnq;Pqrfluoropropqnq 116-12-4

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B4Semicarbazidexy7nochloride鹽酸脲100克實習級，98%

CPE Others Human 人 CPE 人細胞裂解液 (陽性對照) 104-88-14-錄;對錄4-Chloro
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。