副結核分支桿菌PCR檢測試劑盒說明書【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

【產品名稱】: 副結核分支桿菌PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Mycobacterium paratuberculosisPCR
【貨號】: BKP4034
組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

副結核分支桿菌PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

人腎透明細胞癌;Caki-1SaikosaponinB1柴胡皂甙B1100克BR，粘度200 mpe.s

NK-92細胞，人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細胞 人細胞系,Hep-3B細胞 CL-0184PANC-1(人細胞)5×106cells/瓶×2N.N-二基-1.3-炳二安 3-Diqthylcminopropylcminq 104-78-9

中國倉鼠卵巢細胞;CTLA4 Ig-24ProcyanidinB2原矢車菊素B2500ulAR，99%

SLAMF1 Others Human 人 CD150 人細胞裂解液 (陽性對照) 甲基綠shēng huà shì jì容量：1公斤

平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)98-67-9固化劑4-xy7noxybenzenesulfonic acid
EB病毒轉化的人B細胞;KM9801 人脈絡膜細胞完全培養基 100mL紫花前胡苷（標準品）Nodakenin質量規格：HPLC≥98%，標準品

滋養層細胞培養基TM-prf紫蓳靈（標準品）Corynoline質量規格：HPLC≥98%，標準品

EPO Others Mouse 小鼠 Erythropoietin / EPO 人細胞裂解液 (陽性對照) 紫云英苷（標準品）Astragaline質量規格：HPLC≥98%，標準品

大鼠上皮細胞完全培養基 100mL棕櫚酸（標準品）Palmitic acid質量規格：HPLC≥98%，標準品

CV-1細胞，非洲綠猴腎細胞 HPAC(人細胞) CM-H010人小氣道上皮細胞完全培養基100mL王不留行黃酮苷（標準品）Vaccarin質量規格：HPLC≥98%，標準品
Hepa 1-6(小鼠細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0458U-118 MG(人腦星形膠質母細胞瘤)5×106cells/瓶×2 人胎兒胸腺細胞株;HFT-8810 [HFT8810]地塞米,氟美（標準品）Dexamethasone質量規格：HPLC>98%,標準品

人卵巢;PA-1鹽酸地爾硫卓Diltiazem HCL 質量規格：>98%,BR

NCAM1 Others Rat 大鼠 NCAM1 / CD56 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸地爾硫卓(標準品)Diltiazem HCL 質量規格：含量測定，標準品

CL-0433RWPE-2(人正常細胞)5×106cells/瓶×2地美司鈉Dimesna 質量規格：美國進口

SL-7細胞，胚肺細胞 人上皮細胞,RWPE2細胞 人上皮細胞;MCF-10A甲磺酸多拉司瓊Dolasetron mesylate 質量規格：>98.5%,BR
副結核分支桿菌PCR檢測試劑盒說明書HPMEC-c 人肺微內皮細胞(HPMEC) 500,000cells 腦動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)3-去氮腺嘌呤質量規格：美國原裝進口，97%3-Deazaneplanocin A HCl salt

神經元生長添加物NGS4-氧代維甲酰酚胺質量規格：美國原裝進口3-Keto Fenretinide

CA9 Others Canine 狗 Carbonic Anhydrase IX / CA9 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-表米諾環素質量規格：美國原裝進口4-Epi Minocycline

大鼠氣管平滑肌細胞完全培養基 100mL牛磺脫氧膽酸鈉質量規格：>97%,BRTaurodeoxycholic acid  salt

F81細胞，貓腎細胞 NCI-H838 [H838](人細胞) 散鱗鏡鯉尾鰭細胞;YZ21rU亞1酰胺單體質量規格：>98%,BRrU Phosphoramidite

PCR檢測試劑盒

 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。