【產品名稱】: 嗜肺軍團菌PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: legionella pneumophilaPCR
【貨號】: BKP3930

【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產品。

組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

嗜肺軍團菌PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

T-106AIV型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL美康唑，英文名或英文縮寫：Miconazole nitnate，級別：19000～119000,液體,6條帶，規格：1克

小鼠胚胎成纖維細胞;MEF 小鼠肺大動脈平滑肌細胞完全培養基 100mL知母皂苷A1 Timosaponin A1 (HPLC,≥94%) 68422-00-4 10MG 標準品

HUVEC, 人臍內皮細胞 Human拂青務菊酯 FLUCYTHRINcTq 7014-77-2

VCAM1 Others Mouse 小鼠 VCAM1 / L1CAM / CD106 人細胞裂解液 (陽性對照) NUCLEASELIMINATORWIPES去除核酸酶紙巾生物技術級25 PackRT

大鼠腎小球系膜細胞;HBZY-12082-84-0癸基基溴化銨Decyltrimetxylammonium bromide
INSR Others Human 人 Insulin Receptor / INSR / CD220 ( Long Isoform ) 人細胞裂解液 (陽性對照) 三十二烷(standard for GC,≥98.0%(GC))Dotriacontane質量規格：standard for GC,≥98.0%(GC)

心室肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)正庚醇(Standard for GC,>99.5%(GC))1-Heptanol質量規格：Standard for GC,>99.5%(GC)

IgG3 Others Human 人 IgG3-Fc / IGHG3 人細胞裂解液 (陽性對照) γ -丁內酯（GBL）(standard for GC,≥99.9%(GC))4-Hydroxybutanoic acid lactone質量規格：standard for GC,≥99.9%(GC)

大鼠腎實質細胞完全培養基 100mL丙位庚內酯(Standard for GC ,>98.5%(GC))γ-Heptalactone質量規格：Standard for GC ,>98.5%(GC)

CTLA4 Ig-24中國倉鼠卵巢細胞 CTLA4 Ig-24 China hamster ovary cells DMEM培養基+10%FBS(+)-葑酮(standard for GC, ≥99.5% (GC))(+)-Fenchone質量規格：standard for GC, ≥99.5% (GC)
SLAMF7 Others Mouse 小鼠 SLAMF7 / CRACC 人細胞裂解液 (陽性對照) L-天冬氨酸二叔丁基酯鹽酸鹽L-Aspartic acid di-tert-butyl ester hydrochloride質量規格：>98%,BR

人導管瘤細胞;BT-474S-I-G-S-L-A-KS-I-G-S-L-A-K質量規格：>95%,BR

CD84 Others Mouse 小鼠 CD84 人細胞裂解液 (陽性對照) SAMs肽SAMs Peptide質量規格：>95%,BR

Dami 人成巨核細胞細胞猿猴病毒40大抗原氨基段肽段Simian Virus 40 Large Tumor Antigen Amino-Terminal Peptide質量規格：>95%,BR

MHCC-97L人細胞(低轉移) MHCC-97L human hepatoma cells (low metastasis) DMEM+10%FBS生長抑制素-28Somatostatin-28質量規格：>95%,BR
嗜肺軍團菌PCR檢測試劑盒說明書NAMALWA細胞，Butt's 瘤細胞 細胞,KB-C1.5細胞 EB病毒轉化的人B細胞;KMY0903200ul盒裝吸頭100U保存：-20℃

615小鼠瘤株;HP6155-溴-4-錄-3-吲哚-N-酰基-β-D-安基葡糖苷(-20`C) 5-BROMO-4-CHLORO-3-INDOLYL-N-cCqTYL-BqTc-D-GLUCOScMINIDq 2609-91-6

TNFRSF10B Others Human 人 TNFRSF10B / AILR2 / CD262 人細胞裂解液 (陽性對照) BOC-L-纈酸5克RT

人胚胎，皮膚，肌肉;M-20N-羥基-5-降1-2，3-25克RT

CNPY4 Others Human 人 CNPY4 人細胞裂解液 (陽性對照) (利福平)
PCR檢測試劑盒

嗜肺軍團菌PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。