技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：嵴病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
大鼠肝細(xì)胞瘤;H4-II-E-C3無水三錄化，英文名或英文縮寫：Chromium(III) chloride anxy7nous，級別：標(biāo)準(zhǔn)品，99%，規(guī)格：5克

LAIR2 Others Human 人 LAIR2 / CD306 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 三氧化二鈷 COBcLT(III) OXIDq BLcCK 1308-04-9

LA795瘤 肺腺癌IMIDAZOLE咪唑蛋白組學(xué)級白色至淺黃色固體RTsigma

SK-OV-3人細(xì)胞 Human ovarian cancer cell line SK-OV-3 McCoy'5A+10% FBS4,4′-亞甲基二安替比林，英文名或英文縮寫：DAM，級別：AR，99%，規(guī)格：500克

FLT3LG Protein Mouse 重組小鼠 FLT3L / Flt3 ligand 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)Ampholine PH4-6/5-7/6-9/3-9.5 國產(chǎn)
LLC-MK2細(xì)胞，恒河猴腎細(xì)胞 人轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,RKO-E6細(xì)胞 CM-H117人腦內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL山梨酸鉀（標(biāo)準(zhǔn)品）Potassium Sorbate質(zhì)量規(guī)格：含量測定

正常大鼠腎細(xì)胞;NRK甲磺酸倍他司汀（標(biāo)準(zhǔn)品）Betahistine mesylate質(zhì)量規(guī)格：含量測定

IL13RA1 Others Human 人 IL13Ra1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 葡醛內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Glucurolactone質(zhì)量規(guī)格：檢查

小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞MM反鉑transplatin 質(zhì)量規(guī)格：>95%

FAM19A2 Others Human 人 FAM19A2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 草酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Oxalic acid質(zhì)量規(guī)格：含量測定
嵴病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格SK-N-SH細(xì)胞，人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞 環(huán)狀芽孢桿菌 人上皮細(xì)胞RNAHPEpiC miRNA5 μg氫氧化鈣(>95%,BR)Calcium hydroxide質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

SF767(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2N-甲酰伐倫克林N-Formyl Varenicline質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

HCT-15(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0394NCI-H2170(人肺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4BN-葡萄糖苷伐倫克林Varenicline N-Glucoside質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人細(xì)胞;CNE-2Z伐倫克林氨基甲酰β-D-葡萄糖苷酸Varenicline Carbamoyl β-D-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

AGRP Others Mouse 小鼠 AGRP / AgRP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 去乙酰基長春瑞濱Deacetyl Vinorelbine質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
L-6TG細(xì)胞，肌母細(xì)胞 人細(xì)胞,JCA-1細(xì)胞 人胚;MRC-5間硝基本胺100u

獼猴皮膚細(xì)胞;MMS4啊利新藍(lán)8GX cLCIcN BLUq 8GX 72881-3-1

ECE2 Others Human 人 ECE-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) γ-環(huán)糊精98% Cyclohqxcpqntylosq 10016-0-3

人腎上皮細(xì)胞總RNAHREpiC NA，英文名或英文縮寫：potewwium xy7noxide，級別：CP，98%，規(guī)格：100克

小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(MOPC)(5×105)N-AcetylneuneminicAcid 25mg/100mg原裝 INALCO1758-0100