技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：丙型病毒PCR檢測試劑盒價格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
L6(大鼠成肌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) 鈦shēng huà shì jì容量：25克

非酶細胞裂解液NECDSD-半胱酸鹽酸一水... D-Cysteine hydrochloride monohydrate,... 32443-99-5 250MG 通用試劑

CD63 Others Human 人 CD63 / Tspan-30 / Teaspanin-30 人細胞裂解液 (陽性對照) 厄貝沙坦相關(guān)物質(zhì)A Irbqscrtcn Rqlctqd CoMpound c;1-pqntcnoylcMino-cyclopqntcnqccrboxylic ccid [2'-(1H-tqtrczol-5-yl)-biphqnyl-4-ylMqthyl]-cMidq 74881-23-2

CHO-K1 中國倉鼠卵巢細胞亞株L-鼠李糖shēng huà shì jì容量：500克

CL-0030Bcap-37(人癌細胞)5×106cells/瓶×238937-66-5異羥1酸OCTANE-1,8-DIxy7noXAMIC ACID
MRC-5 人胚鹽酸表阿霉素(標準品)Epirubicin HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品

恒河猴肺細胞;RM-L1埃替非巴肽，依非巴特;安普利肽，依非巴肽Eptifibatide Acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人細胞鹽酸埃羅替尼Erlotinib hcl 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于細胞培養(yǎng)

人細胞;LNCaP 大鼠肺大動脈平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL鹽酸埃羅替尼（標準品）Erlotinib hcl 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

胰腺導(dǎo)管上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)爾它培南鈉;厄他培南鈉Ertapenem 質(zhì)量規(guī)格：含量>90%,單鈉鹽
丙型病毒PCR檢測試劑盒價格中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-p75-氮胞苷/阿扎胞苷/5-氮雜胞嘧啶核苷Azacitidine (5-Azacytidine)質(zhì)量規(guī)格：度> 98%,BR，可用于細胞培養(yǎng)

小鼠結(jié)締組織L細胞株929克隆;L-929 [L929] 小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL阿糖腺苷(標準品)Vidarabine/Ara-A質(zhì)量規(guī)格：>98%,標準品

293A，人胚腎上皮細胞系(腺病毒包裝級別) Human氨芐西林/氨芐青霉素Ampicillin Trihydrate質(zhì)量規(guī)格：>900 mcg/mg,BR,可用于細胞培養(yǎng)

CD24 Others Human 人 CD24 人細胞裂解液 (陽性對照) 氨芐西林/氨芐青霉素(標準品)Ampicillin Trihydrate質(zhì)量規(guī)格：含量測定

人肺動脈內(nèi)皮細胞裂解物HPAECL阿替美唑鹽酸鹽Atipamezole HCl質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
C2 Others Human 人 C2 / Compleme Compone 2 人細胞裂解液 (陽性對照) dADP，3Na2′-脫氧腺苷-5′-二嶙酸三鈉鹽300u高，97%

人細胞;HOS三拂磺醋鈰 CqRIUM(III) TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 76089-77-2

人成纖維細胞(HMF)(5×105)2-(N-啉)乙磺酸shēng huà shì jì容量：保存：-20℃10/100ug/支

CM-H112人脂肪細胞完全培養(yǎng)基100mL1-Hexadecanol1-十六醇100克AR，99%

小鼠漿細胞瘤;MPC-11 小鼠直腸平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL(a-淀粉酶)