鳩寧病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個(gè)月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；
u 運(yùn)輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

【產(chǎn)品名稱】: 鳩寧病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書
【英文名稱】: Junin Virus(JUNV)RTPCR
【貨號(hào)】: BKP3914
組成及試劑配制:

酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。

鳩寧病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

HBE, 正常人上皮細(xì)胞系2-()乙磺酸shēng huà shì jì容量：保存：-20℃200微升/支

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0903 新生兒細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL酚AS-TR乙酸酯 Naphthol AS-TR acetate 35245-26-2 50MG 通用試劑

成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM-acfGN增菌培養(yǎng)基 Grcm Nqgctivq qnrichmqnt Mqdium

Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragme (aa 367-606) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) TERRIFICBROTH,POWDER*肉湯, 粉末生物技術(shù)級(jí)粉末RT不sigma

雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7111-77-3二乙二醇單2-(2-metxoxyethoxy)ethanol
LYG1 Others Human 人 Lysozyme G-like 1 / LYG1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 三十烷醇(>98%,植物激素級(jí))Triacontanol質(zhì)量規(guī)格：>98%,植物激素級(jí)

MCF-7(MCF7)(ATCC來源), 人癌細(xì)胞4-羥基苯(>98.0%，BR)4-Hydroxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格：>98.0%，BR

rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 正常人細(xì)胞，Hs 181.Tes細(xì)胞 LLC-MK2(恒河猴腎細(xì)胞)低內(nèi)牛血清白蛋白Albumin, from bovine pH 7.0 Low endotoxin質(zhì)量規(guī)格：>97%,Biotech Grade

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO 320DM [COLO320DM]梭菌蛋白酶Clostripain質(zhì)量規(guī)格：酶活：>50U/mg,進(jìn)分

TNFRSF21 Others Human 人 DR6 / TNFRSF21 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2'-脫氧鳥苷-5'-一1酸二鈉鹽(分子生物學(xué)級(jí))dGMP, 2'-Deoxyguanosine-5'-monophosphate di salt質(zhì)量規(guī)格：>98%，分子生物學(xué)級(jí)
FCGRT & B2M Others Human 人 FCGRT & B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) L-精氨酸-α-酮戊二酸鹽（2:1）L-Arginine AKG 2:1質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

EC-304? 人內(nèi)皮細(xì)胞L-谷氨酸-5-甲酯L-Glutamic acid 5-methyl ester質(zhì)量規(guī)格：0.98

CM-M054小鼠子宮成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLN-乙酰-L-亮氨酸N-Acetyl-L-leucine質(zhì)量規(guī)格：>99%

HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細(xì)胞N'-Cbz-L-鳥氨酸L-Orn(Z)-OH質(zhì)量規(guī)格：0.98

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0904 細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLN-乙酰-L-丙氨酸N-Acetyl-L-phenylalanine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
鳩寧病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書人細(xì)胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]膽甾醇乙酸脂，英文名或英文縮寫：Cholesteryl acetate，級(jí)別：高，98%，規(guī)格：200U

CD80 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD80 / B7-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 肖醋鈰 99% CqRIUM(III) nitncTq HqXcHYDRcTq 1094-41-4

CM-H106人內(nèi)臟脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLAMMONIUMPHOSPHATE,MONOBASIC嶙酸二氫ACS級(jí)白色結(jié)晶粉末RTsigma

MGC803-GFP細(xì)胞，綠色熒光蛋白標(biāo)記人細(xì)胞 人成細(xì)胞,Saos-2細(xì)胞 293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA-GPL-MINEL-甲(蛋酸)美國(guó)藥典級(jí)500G63-68-3COLD

Eca-109(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2a-Amylase 500g 國(guó)產(chǎn)

PCR檢測(cè)試劑盒

 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。