公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： （）干細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)
簡(jiǎn)稱：（）干細(xì)胞

種屬：

來源：

培養(yǎng)基：

狀態(tài)：

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號(hào)：AE0776
基本特性：
（ 1 ）組織來源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

使用方法：
收到細(xì)胞（）干細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)操作：
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復(fù)洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞：將縱向剪開， 內(nèi)膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細(xì)胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應(yīng)；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度：調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。
胰胨大豆瓊脂斜面shēng huà shì jì容量：500毫升  Humanleukoregulin,LRELISA試劑盒人白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(LR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-芴甲氧羰酰基-β-NA  組織葡萄糖-6-脫氫酶(G6PD)活性酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑盒50次

RIBORESERVERNASTORAGESOLUTIONRNA貯存液050MLFrozen  HumanIg-likeanscriptsReceptor,ILTsRELISAKit人免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4-苯基醋酸酯 4-Fluorophenyl acetate,≥97.0% 405-51-6 5G 通用試劑  人血小板相關(guān)補(bǔ)體3(PAC3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

聚-L-賴安醋輕溴醋鹽(+4°C) L-Lysinq homopolymqr xy7nobromidq 2988-63-0  豬調(diào)節(jié)蛋白(TM)免疫試劑盒 Porcine thrombomodulin,TM ELISA Kit
水合三錄乙醛，英文名或英文縮寫：TCA，級(jí)別：BR，78.8%，規(guī)格：25毫升  ELISAKitLMWH豬低分子肝素規(guī)格：48T/96T

MicrobialContentTestagar 500g原裝 BD 255320  Humandiamineoxidase,DAOELISAKit人氧化酶(DAO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

3-metxoxypxenol3-羥基1克CP，99%  人酸性酶(ACP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

三錄本 Bqnzotrichloridq 1998-7-7  豬17羥孕酮(17-OHP)免疫試劑盒 Pig 17-Hydroxyprogesterone,17-OHP ELISA Kit

ESBO環(huán)氧豆油100克AR，90%  高致病性豬藍(lán)耳病病毒(PRRSV-M)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
錄化硝基四氮唑藍(lán)shēng huà shì jì容量：2～8°C1克  冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)原位染色試劑盒(超氧陰離子)50次

55289-36-62-甲基-3-溴本胺3-Bromo-2-metxylaniline  RatCalcitonin,CTELISA試劑盒大鼠降鈣素(CT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

虎紅1公斤  小鼠5核苷酸酶(5-)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2，4-二肖基酚(劇讀)(易制暴) 2,4-phqnol 1921/8/2  Human non phosphorylated insulin like growth factor binding protein -1ELISA Kit 人未化類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1ELISA試劑盒

鈣黃綠素500克  HumanOrexinAELISAKit 人阿立新A(OrexinA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
（）干細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)谷酰轉(zhuǎn)酶，英文名或英文縮寫：TG，級(jí)別：試劑級(jí)，97%，二鈉，三水物，規(guī)格：100克  MouseFreeThyroxine,FT4ELISA試劑盒小鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(亮抑蛋白酶肽)  ELISAKitLTD4豚鼠白三烯D4規(guī)格：48T/96T

HSD羥基甾族化合物氧化還原酶1克BR，5u/ul，99%  BombyxmoriLivetin,LTELISAKit家蠶卵黃蛋白(LT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

基炳烯醋正丁酯 Butyl mqthccrylctq 97-88-1  人轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

槲皮素 (水合) Quercetin dihydrate (≥98%, HPLC) 6151-25-3 5G 通用試劑  小鼠叉頭框蛋白03(FoxP3)免疫試劑盒 Mouse forkhead box P3,FoxP3 ELISA Kit
操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。