公司產品僅用于科研
中文名稱： 人胚現(xiàn)貨供應
簡稱：HFL1

種屬：人

來源：胚胎；肺；成纖維細胞；男性

培養(yǎng)基：DMEM

狀態(tài)：貼壁

產品規(guī)格：

單位：

貨號：AE0034
基本特性：
（ 1 ）組織來源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每凍存管細胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細菌、酵母和真菌。

使用方法：
收到細胞人胚現(xiàn)貨供應后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實驗操作：
1、培養(yǎng)瓶預包被。試驗前一天預包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動脈。
3、材料預處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無菌鑷子剝去外膜面的殘留組織。PBS洗滌凈。
4、除去內皮細胞：將縱向剪開， 內膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復刮動內膜層4-5遍，去掉內皮細胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內膜的，繼續(xù)刮動分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復消化3次。
8、收集重懸細胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計數(shù)細胞。
9、培養(yǎng)細胞密度：調整細胞密度以5 × 105個/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。
Benzyl carbamate  621-84-1  中文名：氨基甲酸芐酯  分子式：C8H9NO2  度：98.0%      小鼠腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Benzyl 4-hydroxybenzoate  94-18-8  中文名：4-羥基苯甲酸芐酯  分子式：C14H12O3  度：98.0%      小鼠腦啡肽（ENK）ELISA試劑盒   96T   試劑盒   組裝/原裝        

Benzyl 4-bromophenyl ketone  2001-29-8  中文名：芐基4-溴代苯基酮  分子式：C14H11BrO  度：98.0%      小鼠末端補體復合物C5b-9(TCCC5b-9)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Benzyl 2-aminoacetate p-sulfonate  1738-76-7  中文名：  分子式：C16H19NO5S  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠內皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Benzyl 2,4-dihydroxyphenyl ketone  3669-41-8  中文名：2,4-二羥基苯基芐酮  分子式：C14H12O3  度：98.0%      小鼠補體蛋白4(C4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
小鼠基質金屬蛋白酶-2   英文名稱：   maix metalloproteinase 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MMP-2  Diphenhydramine   中文名：鹽酸苯海拉明  分子式：C17H22ClNO  度：98.0%

小鼠基質金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           DL-2-Amino-n-octanoic acid  644-90-6  中文名：DL-2-氨基正辛酸  分子式：C8H17NO2 

小鼠基質金屬蛋白酶-1(mouse MMP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Dioxopromethazine   中文名：鹽酸二氧丙嗪  分子式：C17H21ClN2O2S  度：99.0%

小鼠基質金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Diosgenin  中文名：薯蕷皂苷元  分子式：C27H42O3  度：98.0%

小鼠基脲敏感性胺氧化酶（SSAO）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Candesartan  中文名：坎地沙坦  分子式：C24H20N6O3
Jacaranone  60263-07-2  中文名：  分子式：C9H10O4    Rat platelet activating factor (PAF) ELISA Kit 大鼠血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒

3-Hydroxychimaphilin  33253-99-5  中文名：3-羥基梅笠草素  分子式：C12H10O3    Humansolublevascularendothelialgrowthfactorreceptor-2,VEGFR-2/sFLK-1ELISAKit 人可溶性內皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Chimaphilin  482-70-2  中文名：梅笠草素  分子式：C12H10O2    HumanE2/ubiquitin-conjugatingenzyme,E2/UBCEELISA試劑盒人泛素結合酶(E2/UBCE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Prerubialatin  1667718-89-9  中文名：  分子式：C27H20O7    組織PAK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

(S)-4-Methoxydalbergione  2543-95-5  中文名：(S)-4-甲氧基黃檀醌  分子式：C16H14O3    Humanpermeabilityglycoprotein,P-gpELISAKit人P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人胚現(xiàn)貨供應Sulfadiazine  68-35-9  中文名：磺胺嘧啶  分子式：C10H10N4O2S    兔壞死因子-a(rabbit TNF-a)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

Rifampicin  13292-46-1  中文名：利福平  分子式：C43H58N4O12    兔干細胞因子(rabbit SCF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Dyphylline  479-18-5  中文名：二羥丙茶堿  分子式：C10H14N4O4    兔轉化生長因子-a(rabbit TGF-a)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Sulfamethazine  57-68-1  中文名：磺胺二甲嘧啶  分子式：C12H14N4O2S    兔轉化生長因子-β1(rabbit TGF-b1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Lomefloxacin   98079-52-8  中文名：鹽酸洛美沙星  分子式：C17H20ClF2N3O3    兔轉化生長因子-b2(rabbit TGF-b2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝
操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。產品僅供科研使用
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。