PCR實驗方法步驟：
芥末源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
產(chǎn)品僅供科研使用3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱：芥末源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年

注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人肝細胞;HL-7702[L-02]核黃素-5-嶙酸鈉鹽二水物，英文名或英文縮寫：FMN-Na，級別：ACS，98%，規(guī)格：5克

ENPEP Others Mouse 小鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 5，7，4’-三羌基皇同(-20℃) cpigqnin 20-36-2

CL-0310VE(人內(nèi)皮細胞)5×106cells/瓶×2CHLORIDE,ANxy7noUS錄化,無水*白色薄片RTsigma

RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞 人單核細胞型瘤，THP1細胞 GC-2spd(ts)(小鼠精母細胞)錄亞明T，英文名或英文縮寫：Chloramine T trihydrate，級別：超，99%，規(guī)格：100毫克

綠色熒光蛋白標記人細胞;MGC803-GFPAgarose,TypeA 100g Spannish原裝
PRL Protein Mouse 重組小鼠 PRL / Prolactin 蛋白 (His 標簽)米諾地爾（標準品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Minoxidil

人胚胎膀胱組織來源細胞;CCC-HB-2 人肺動脈成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL7-羥基-4-甲基（標準品）質(zhì)量規(guī)格：≥97%,標準品7-Hydroxy-4-methylcoumarin

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞;PUMC-mips-D27-羥基-4-甲基質(zhì)量規(guī)格：≥97%,BR7-Hydroxy-4-methylcoumarin

LAIR1 Others Mouse 小鼠 LAIR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 十一酸睪酮（標準品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Testosterone undecanoate

人胰腺星狀細胞完全培養(yǎng)基 100mL鄰香蘭素(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%，BRo-Vanillin
GAD2 Others Mouse 小鼠 GAD65 / GAD2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 1-奈乙二，英文名或英文縮寫：N-(1-Naphthyl)etxylenediamine，級別：CP，97%，規(guī)格：100毫克

人原胚腎轉(zhuǎn)化細胞;293 Ad5氧化銅絲 Coppqr oxidq;Coppqr Monoxidq;Blcck coppqr oxidq 1317-38-0

Jurkat,Clone E6-1細胞，T細胞細胞 人細胞系,SUNE-1亞株13-9B細胞 CL-0346HBE(人上皮樣細胞)5×106cells/瓶×2PROTEINMWMARKER,WIDERANGE蛋白Marker生物技術(shù)級透明無色溶液FROZENsigma

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414)N-三(羥甲基)甲基-3-基磺酸shēng huà shì jì容量：保存：-20℃50/300ul/支

LDLR Others Human 人 LDLR / LDL Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) 3179-76-83-基甲基二乙氧基硅烷3-Aminopropyl-metxyl-diethoxysilane
芥末源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒NCI-H292(人細胞) 5×106cells/瓶×23,4,5,6-四氯熒光素3,4,5,6-Tetrachlorofluorescein質(zhì)量規(guī)格：熒光染料

Promocell C-26001 Renal Epithelial Cell GrowthMedium , 腎上皮細胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml赤蘚紅B(>95.0%(E))Erythrosine B質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(E)

間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基MSCM-acf-prf4-正辛氧基苯(>98.0%(GC))4-n-Octyloxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

PTPN2 Others Human 人 PTPN2 / TC-PTP (aa 1-314) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 4-十八烷氧基苯(>95.0%(GC))4-Octadecyloxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KM05014-丙氧基苯(>97.0%(GC))4-Propoxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

操作流程：
產(chǎn)品僅供科研使用1. 整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。