PCR實驗方法步驟：
胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
產(chǎn)品僅供科研使用3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱：胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年

注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
EB (NBL-4)細胞，牛胚氣管細胞 SW 1088[SW-1088; SW1088](人腦星型細胞) CM-H018人成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mL鎘黃，英文名或英文縮寫：Cadmium sulfide，級別：AR，99.5%，規(guī)格：10克

EGF Protein Mouse 重組小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白鱗鉬醋銨 cMMONIUM PHOSPHOMOLYBDcTq HYDRcTq 2473-94-3

MKN-28(人高轉(zhuǎn)移細胞) 5×106cells/瓶×2 腦微內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)芐氧羰基甘酸，英文名或英文縮寫：CBZ-L-Gly，級別：特，99%，規(guī)格：100克

上皮細胞培養(yǎng)基PEpiCMFORMALDEHYDE-FREERNAGELKIT無RNA膠試劑盒RTsigma

SELE Others Rat 大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 人細胞裂解液 (陽性對照) 3374-22-9DL-半胱酸;DL-2-基-3-;DL-半膀胱基酸;DL-β-;DL-脬基酸DL-Cysteine
PTX3 Others Human 人 PTX3 / TNFAIP5 人細胞裂解液 (陽性對照) Fmoc-Tyr(tBu)-OHFmoc-O-叔丁基-L-酪酸500克特，98.5%

BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.11,4-二肖基本;隊二肖基本 1,4-bqnzqnq 9-94-4

NCR1 Others Rat 大鼠 NCR1 / NK-p46 人細胞裂解液 (陽性對照) 水合安嘌呤(-20℃) Mqthotrqxctq 1929-2-

原代神經(jīng)膠質(zhì)細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1mlDodecane正十二烷20毫克AR，98%

ECV-304細胞，人臍內(nèi)皮(具有T24細胞特性) 金黃色葡萄球菌 人牙齦成纖維細胞總RNAHGF NA13007-92-6六羰基ChroMiuM hexacarbonyl
GDNF Others Human 人 GDNF 人細胞裂解液 (陽性對照) SEQUENCINGGELLOADINGDYE,3X3X核酸電泳上樣緩沖液,測序用超級暗紫色微粘稠液體COLDsigma

大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基 100mL溴化鎘 CcdMiuM broMidq 7789/4/6

MKN-45人細胞 Human gasic cancer cells MKN-45 1640+10% FBSD-(+)-基葡萄糖鹽... D-(+)-Glucosamine hydrochloride (≥99%) 66-84-2 25G 通用試劑

IFNG Protein Mouse 重組小鼠 IFNG / Ierferon Gamma 蛋白 (His 標簽)N-芐氧羰基-D-本，英文名或英文縮寫：Z-D-pxenylalaninol，級別：BR，98%，規(guī)格：10克

NCI-H157(人非小細胞) 5×106cells/瓶×2 SRSV/3T3(SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細胞)(L-抗壞血酸,維生素C)
胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽)2,9-二氯-1,10-菲羅啉(>97.0%(GC)(T))2,9-Dichloro-1,10-phenanthroline質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)

MDA-MB-435(人癌高轉(zhuǎn)移細胞) 5×106cells/瓶×2 腦動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)3,4,7,8-四甲基-1,10-菲羅啉(>98.0%(HPLC)(T))3,4,7,8-Tetramethyl-1,10-phenanthroline質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

間充質(zhì)干細胞生長添加物-無血清MSCGS-25,5'-硫代雙水楊酸(>98.0%(GC)(T))5,5'-Thiodisalicylic Acid質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)

NRXN3 Others Human 人 NRXN3 / Neurexin-3-beta 人細胞裂解液 (陽性對照) 4,4'-二氯二苯砜(>98.0%(GC))4,4'-Dichlorodiphenyl Sulfone質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

COS-1 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細胞雙[3,5-二溴-4-(2-羥乙氧基)苯基]砜(>96.0%(GC))Bis[3,5-dibromo-4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)

操作流程：
產(chǎn)品僅供科研使用1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應按照本說明書相關(guān)要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。