PCR實驗方法步驟：
斑石鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
產品僅供科研使用3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

產品參數：
產品名稱：斑石鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Spotted Knifejaw Iridovirus(SKIV)
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年

注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人正常上皮細胞;MCF 10AAmresco 進分瓊脂粉質量規格：BR,進分Agar

人肺動脈平滑肌細胞(HPASMC) ( 5×105 )氟伏沙明質量規格：>98%,油狀Fluvoxamine

CL-0325C3H/10T1/2, Clone 8(小鼠胚胎成纖維細胞)5×106cells/瓶×2醋酸鋅（二水）質量規格：AR,>98%Zinc acetate

人侵襲性脈絡膜色素瘤細胞;M619 大鼠胎兒真皮成纖維細胞完全培養基 100mL舒巴坦鈉質量規格：BR,>99%Sulbactam

H-4-II-E 大鼠肝細胞瘤細胞9-溴芴(>98.0%(T))質量規格：>98.0%(T)9-Bromofluorene
人表皮微內皮細胞(HDMEC)( 5×105 ) 人少突膠質細胞 Human雷氏曼著色劑質量規格：BSLeishman's stain

CM-H033人腸微內皮細胞完全培養基100mL來普霉素B 1%溶液質量規格：>95%(HPLC),BCLeptomycin B 1% soluton

DDR1 Others Rat 大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細胞裂解液 (陽性對照) 醋酸氟氫可的(標準品)質量規格：含量97%-103%,標準品Fludrocortisone acetate

人平滑肌細胞HBVSMC醋酸氟氫可的質量規格：>97%Fludrocortisone acetate

HEL細胞，人紅白細胞細胞 小鼠腎集合管細胞(SV40轉化),M-1細胞 成纖維細胞培養基FM-acf阿折地平質量規格：>99%,BRAzelnidipine
大鼠骨骼肌成肌細胞;L6UREA尿素超級白色粉末RTsigma

HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 十五烷酸 Pentadecanoic acid,99% 1002-84-2 10G 通用試劑

T-103AI型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mLHE瓊脂 HqKTOqN qNTqRIC cGcR FOR

TU 686細胞，人細胞 人臍內皮細胞,ECV-304細胞 中國倉鼠卵巢細胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr-CALCIUMCHLORIDE,ANxy7noUS錄化鈣,無水ACS級白色精細片狀粉末RTsigma

C-33 A(人子細胞) 5×106cells/瓶×21079-66-9二本基錄化膦Chlorodipxenylphosphine
斑石鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒3T3細胞，小鼠成纖維細胞 COLO 205(細胞) 人腎透明細胞癌;Caki-1(1S,4S)-N-去甲基鹽酸舍曲林(1S,4S)-N-Desmethyl Sertraline Hydrochloride質量規格：美國進口

CSF2 Protein Mouse 重組小鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (His 標簽)N-去甲基利福平N-Demethyl Rifampin質量規格：美國進口

T-47D(人管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 神經氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 去甲基波生坦Desmethyl Bosentan質量規格：美國進口

人表皮色素細胞-淺色素HEM-l羥基去甲基波生坦Hydroxy Desmethyl Bosentan質量規格：美國進口

CD22 Others Human 人 Siglec-2 / CD22 人細胞裂解液 (陽性對照) 波生坦Bosentan質量規格：美國進口

操作流程：
產品僅供科研使用1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進行操作，各區實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉移至標本準備區，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。