PCR實驗方法步驟：
斑石鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
產(chǎn)品僅供科研使用3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱：斑石鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Spotted Knifejaw Iridovirus(SKIV)
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年

注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人正常上皮細胞;MCF 10AAmresco 進分瓊脂粉質(zhì)量規(guī)格：BR,進分Agar

人肺動脈平滑肌細胞(HPASMC) ( 5×105 )氟伏沙明質(zhì)量規(guī)格：>98%,油狀Fluvoxamine

CL-0325C3H/10T1/2, Clone 8(小鼠胚胎成纖維細胞)5×106cells/瓶×2醋酸鋅（二水）質(zhì)量規(guī)格：AR,>98%Zinc acetate

人侵襲性脈絡(luò)膜色素瘤細胞;M619 大鼠胎兒真皮成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL舒巴坦鈉質(zhì)量規(guī)格：BR,>99%Sulbactam

H-4-II-E 大鼠肝細胞瘤細胞9-溴芴(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)9-Bromofluorene
人表皮微內(nèi)皮細胞(HDMEC)( 5×105 ) 人少突膠質(zhì)細胞 Human雷氏曼著色劑質(zhì)量規(guī)格：BSLeishman's stain

CM-H033人腸微內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基100mL來普霉素B 1%溶液質(zhì)量規(guī)格：>95%(HPLC),BCLeptomycin B 1% soluton

DDR1 Others Rat 大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細胞裂解液 (陽性對照) 醋酸氟氫可的(標準品)質(zhì)量規(guī)格：含量97%-103%,標準品Fludrocortisone acetate

人平滑肌細胞HBVSMC醋酸氟氫可的質(zhì)量規(guī)格：>97%Fludrocortisone acetate

HEL細胞，人紅白細胞細胞 小鼠腎集合管細胞(SV40轉(zhuǎn)化),M-1細胞 成纖維細胞培養(yǎng)基FM-acf阿折地平質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRAzelnidipine
大鼠骨骼肌成肌細胞;L6UREA尿素超級白色粉末RTsigma

HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 十五烷酸 Pentadecanoic acid,99% 1002-84-2 10G 通用試劑

T-103AI型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mLHE瓊脂 HqKTOqN qNTqRIC cGcR FOR

TU 686細胞，人細胞 人臍內(nèi)皮細胞,ECV-304細胞 中國倉鼠卵巢細胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr-CALCIUMCHLORIDE,ANxy7noUS錄化鈣,無水ACS級白色精細片狀粉末RTsigma

C-33 A(人子細胞) 5×106cells/瓶×21079-66-9二本基錄化膦Chlorodipxenylphosphine
斑石鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒3T3細胞，小鼠成纖維細胞 COLO 205(細胞) 人腎透明細胞癌;Caki-1(1S,4S)-N-去甲基鹽酸舍曲林(1S,4S)-N-Desmethyl Sertraline Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CSF2 Protein Mouse 重組小鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (His 標簽)N-去甲基利福平N-Demethyl Rifampin質(zhì)量規(guī)格：美國進口

T-47D(人管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 去甲基波生坦Desmethyl Bosentan質(zhì)量規(guī)格：美國進口

人表皮色素細胞-淺色素HEM-l羥基去甲基波生坦Hydroxy Desmethyl Bosentan質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CD22 Others Human 人 Siglec-2 / CD22 人細胞裂解液 (陽性對照) 波生坦Bosentan質(zhì)量規(guī)格：美國進口

操作流程：
產(chǎn)品僅供科研使用1. 整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。