PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
普雷沃菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
產(chǎn)品僅供科研使用3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱：普雷沃菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Prevotella spp.
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年

注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
CCL18 Protein Human 重組人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白 (His 標(biāo)簽)偏釩酸鈉shēng huà shì jì容量：0.25毫升

MCF-7(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2,5-二溴 2,5-Dibromopyridinq 64-8-

貓腎細(xì)胞;CRFK正shēng huà shì jì容量：100克

人顱骨造骨細(xì)胞 (HCO) ( 5×105 )馬丁肉湯shēng huà shì jì容量：RT支

CL-0099HEC-1-A(人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×278-79-5, 99%Isoprene
KYSE450 橘霉素，英文名或英文縮寫：Citrinin，級(jí)別：組織培養(yǎng)級(jí)，10KU/ml，規(guī)格：500毫克

RL95-2人細(xì)胞 Human endomeial carcinoma cells RL95-2 D-MEM/F-12培養(yǎng)基+10%FBS十六烷基二基基溴化銨 (EHDAB) CqTYLDIMqTHYLqTHYLcMMONIUM BROMIDq 2014/3/8

HGF Protein Mouse 重組小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白 (His 標(biāo)簽)SULFATEHEPTAHYDRATE,七水ACS級(jí)白色粉末RTsigma

小小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(MM)(5×105) RBE, 人肝細(xì)胞 Human葡糖酸鉀鹽，英文名或英文縮寫：potewwium gluconate，級(jí)別：土豆來源，規(guī)格：1克

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化);PC-12(低分化)4-Chloro-1-Naphthol 5g/10g/25g/50g原裝 Amresco 0398
HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 酞菁銅(II)(β-型)(>90.0%(T))Copper(II) Phthalocyanine (β-form)質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(T)

小鼠子細(xì)胞;U14三(1,3-二苯基-1,3-丙二酮基)(1,10-鄰二氮雜菲)銪(Ⅲ)(>95.0%(T))Tris(1,3-diphenyl-1,3-propanedionato)(1,10-phenanthroline)europium(III)質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

METAP2 Others Mouse 小鼠 METAP2 / MAP2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 3-(2-苯并噻唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(HPLC)(T))3-(2-Benzothiazolyl)-7-(diethylamino)coumarin質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

CM-M001小鼠肺微內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL 3-(2-苯并咪唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(T))3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Hela, 人細(xì)胞系 小鼠成纖維細(xì)胞,3T3TK細(xì)胞 SPA-A1()4,4'-雙(5-甲基-2-苯并惡唑基)芪(升華提)(>96.0%(HPLC))4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene (purified by sublimation)質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(HPLC)
普雷沃菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒JEG-3(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 輪環(huán)藤寧四乙酸/1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四乙酸Tetraxetan/DOTA/1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid質(zhì)量規(guī)格：>95%

人成細(xì)胞;Saos-2p, p’-DDE(標(biāo)準(zhǔn)品)p, p’-DDE質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

PPP3CA Others Human 人 PPP3CA / 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) p, p’-DDE標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)p, p’-DDE solution質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=3%

CL-0429Romas(人瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2敵草腈(標(biāo)準(zhǔn)品)Dichlobenil質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

人絨毛膜內(nèi)皮細(xì)胞 人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞，CCC-ESF-1細(xì)胞 Sol8(小鼠骨骼肌肌肉母細(xì)胞)乙二醇苯(標(biāo)準(zhǔn)品)Ethylene glycol monophenyl ether質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)

操作流程：
產(chǎn)品僅供科研使用1. 整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。