PCR實驗方法步驟：
問號鉤端螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
產品僅供科研使用3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

產品參數：
產品名稱：問號鉤端螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Leptospira interrogans
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年

注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人平滑肌細胞裂解物HCSMCL肌酸，英文名或英文縮寫：Creatine Monohydrate，級別：BR，99%，規格：25克

AMTN Others Human 人 AMTN / Amelotin 人細胞裂解液 (陽性對照) 1.2- 1,2-BUTcNqDIOL 284-03-

小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swiss albino三氧化鉬 Molybdqnum trioxidq 1313-7-2

tTA基因修飾的小鼠(B類);P19-CAG-tTA-1F3 彈性蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL5-嶙酸吡哆醛，英文名或英文縮寫：PLP，級別：IND，規格：5克

A549, 人細胞系 HumanEC肉湯EC BROTH FOR MICROBIOLOGY
EFNA1 Protein Human 重組人 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 標簽)(S)-2-基-3-(4-咪唑基)，英文名或英文縮寫：L-Histidine，級別：BR，99%，規格：10克

EJ(人細胞) 5×106cells/瓶×2 肺大平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)-2，4-二硝基... -2,4-DNPH 888-54-0 1ML 標準品

間充質干細胞脂肪細胞分化培養基MADM-prf二茂鐵;環務二1鐵 Fqrrocqnq;Biscyclopqntcdiqnyl iron;Di-2,4-cyclopqntcdiqn-1-yl iron 10-24-2

CDCP1 Others Mouse 小鼠 CDCP1 人細胞裂解液 (陽性對照) 4,4'-Bipyridineγ,γ-聯1克AR，99%

大鼠完全培養基 100mL10034-82-9wo7ium chromate tetrahydrate
GBP1 Others Human 人 GBP1 人細胞裂解液 (陽性對照) 增甘1(>97.0%(T))Glycine-N,N-bis(methylenephosphonic Acid)質量規格：>97.0%(T)

木瓜蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mLN-甲基亞氨二乙酸(>98.0%(GC)(T))N-Methyliminodiacetic Acid質量規格：>98.0%(GC)(T)

PC9-EGFP-puro(慢病毒構建穩定株)人細胞 PC9-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in human lung cancer cells DMEM+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin氮基三乙酸二鈉鹽(>99.0%(T))Nitrilotriacetic Acid Di Salt質量規格：>99.0%(T)

IL32 Protein Human 重組人 Ierleukin-32 / IL-32 蛋白 (isoform alpha, His 標簽)N-(2-羧乙基)亞氨基二乙酸(>98.0%(T))N-(2-Carboxyethyl)iminodiacetic Acid質量規格：>98.0%(T)

人平滑肌細胞(HCSMC)(5×105 ) RLF, 大鼠成纖維細胞 Rattus三乙四胺-N,N,N',N'',N''',N'''-六乙酸(>98.0%(T))Triethylenetetramine-N,N,N',N'',N''',N'''-hexaacetic Acid質量規格：>98.0%(T)
問號鉤端螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒SELE Others Rat 大鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人細胞裂解液 (陽性對照) 蛋白酶K(進分)Proteinase K質量規格：≥30units/mg protein,sigma分裝

CM-H025人胰腺上皮細胞完全培養基100mL蛋白酶K(Sigma)Proteinase K質量規格：≥30units/mg protein,sigma原裝

HuTu-80細胞，人十二指腸腺癌細胞 人色素瘤細胞,HME2細胞 人肝永生化細胞;THLE-3胰凝乳蛋白酶抑制劑Chymostatin質量規格：進分

H9c2(2-1) (大鼠心肌細胞) 5×106cells/瓶×2亮抑蛋白酶肽(進口)Leupeptin 質量規格：≥95%,進口半硫酸鹽

CD80 Others Human 人 B7-1 / CD80 人細胞裂解液 (陽性對照) 胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制劑Pepstatin A microbial質量規格：≥90%,進分

操作流程：
產品僅供科研使用1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進行操作，各區實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉移至標本準備區，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。