PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
急毒探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
產(chǎn)品僅供科研使用3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱：急毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Israeli Acute Paralysis Virus
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年

注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
F344大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells嶙酸三乙酯shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光25克

HME2細(xì)胞，人色素瘤細(xì)胞 干酪乳桿菌干酪亞種 人癌細(xì)胞;MCF7反式-4-氧基肉桂醋異忻酯 4-MqTHOXYCINNcMIC cCID 2-qTHYLHqXYL qSTqR 83834-29-7

USMC(大鼠平滑肌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2昆布多糖shēng huà shì jì容量：100克

IBRS-2(豬腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 Caki-1, 人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞 人細(xì)胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]HE瓊脂500克

人胚;WI-38 [WI38]4472-41-7氘代二甲基價酰按N,N-DImetxYLfonmemi7e-D7
人胚腎細(xì)胞-F克隆;293F酸鉀shēng huà shì jì容量：保存：-20℃1克

P3X63Ag8.653細(xì)胞，細(xì)胞 耐長春新堿細(xì)胞系,HCT-8/VCR細(xì)胞 CM-H028人內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL2，2’-流基-二醇 2,2'-Thiodiqthcnol 111-48-8

正常大鼠腎細(xì)胞;NRK三油酸甘油酯shēng huà shì jì容量：RT100克

REG3A Others Mouse 小鼠 REG3A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 多聚賴酸shēng huà shì jì容量：RT10克

口腔角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基OKM1760-24-3N-[3-(2-基乙基基)丙基]氧基硅烷N-[3-(Trimetxoxysilyl)propyl]etxylenediamine
HUASMC-c 人臍動脈平滑肌細(xì)胞(HUASMC) 500,000cells 胃黏膜上皮Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)左旋肉堿鹽酸鹽(>98%,BR)L-Carnitine hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)左旋肉堿1酸鹽(>99%,BR)L-Carnitine L-tartrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

IL3 Others Human 人 IL-3 / Ierleukin-3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 化(>98%,BR)Lead (II) iodide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1硬脂酸Lead (II) stearate質(zhì)量規(guī)格：BR

3T3-Swiss albino細(xì)胞，胚胎成纖維細(xì)胞 人細(xì)胞,CRL細(xì)胞 CM-M048小鼠腸巨噬細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL硫酸(>99%,BC)Lead (II) sulfate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BC
急毒探針法熒光定量PCR試劑盒轉(zhuǎn)化細(xì)胞 人卵巢成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml)Butachlor solution質(zhì)量規(guī)格：0.100mg/ml

人脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞RNAHCPF miRNA5 μg丁草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Butachlor質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,95%

KYNU Others Human 人 KYNU / Kynureninase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)Butachlor solution質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4%

犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%)Butachlor solution質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=7%

U-2 OS細(xì)胞，細(xì)胞 人二倍體細(xì)胞系,KMB-17細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3炔草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)Buturon質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

操作流程：
產(chǎn)品僅供科研使用1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。