探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

概述：
產品僅供科研使用熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環數的遞增，PCR產物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監測。本公司根據您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監測, 實現基因的相對定量、定量和定性分析。

實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性*的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物考核、病原體檢測等諸多領域。

使用方法：
一、馬虻探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：產品僅供科研使用由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

熒光定量PCR服務：
簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請提供已知的全長基因序列。
（03）請提供盡可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
小鼠漢坦病毒（HV）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Dexmedetomidine   中文名：鹽酸右美托咪定  分子式：C13H17ClN2 

小鼠還原型谷胱甘肽elisa試劑盒   小鼠還原型谷胱甘肽試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠還原型谷胱甘肽試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠還原型谷胱甘肽試劑盒、小鼠還原型谷胱甘肽elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     4-Chloro-6-iodoquinazoline  中文名：  分子式：C8H4ClIN2 

小鼠還原型谷胱甘肽(GSH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  N-(2,6-Dimethylphenyl)-2-piperidinecarboxamide  中文名：  分子式：C14H20N2O 

小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Dexmedetomidine   145108-58-3  中文名：鹽酸右美托咪定  分子式：C13H17ClN2  度：98.0%   

小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Mesterolone  中文名：甲氫睪酮  分子式：C20H32O2
Alogliptin benzoate  850649-62-6  中文名：阿格列汀苯甲酸鹽  分子式：C25H27N5O4  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Alogliptin  850649-61-5  中文名：阿格列汀  分子式：C18H21N5O2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Aloe-emodin  481-72-1  中文名：蘆薈大黃素  分子式：C15H10O5  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)Elisa試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Allylestrenol  432-60-0  中文名：烯丙雌醇  分子式：C21H32O  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)Elisa試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Allyl phenoxyacetate  7493-74-5  中文名：苯氧乙酸烯丙酯  分子式：C11H12O3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠可溶性細胞間粘附分子-1   英文名稱：   Soluble Iercellular Adhesion Molecule-1   規格：   48T/96T   英文縮寫：   sICAM-1
Tolvaptan  中文名：托伐普坦  分子式：C26H25ClN2O3    勻漿制作或抽提   Homogenate production or exaction

Toltrazuril  中文名：托曲珠利  分子式：C18H14F3N3O4S    （皮膚骨骼肌腸肌肉等難勻特殊樣品）   (the skin and skeletal muscle and other hard uniform special sample)

Tolazoline   中文名：鹽酸妥拉唑林  分子式：C10H13ClN2    超氧化物歧化酶（SOD）檢測   Superoxide dismase (SOD) detection

Tokinolide B  中文名：  分子式：C24H28O4    二（MDA）檢測   Malondialdehyde (MDA) detection              

Tofacitinib   中文名：枸櫞酸托法替尼  分子式：C22H28N6O8    載脂蛋白B（ApoB）測定試劑盒（比濁法）
馬虻探針法熒光定量PCR試劑盒Diethyl 2-acetamido-2-(4-octylphenethyl)malonate  162358-08-9  中文名：  分子式：C25H39NO5    組織IKKβ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Tropisetron   105826-92-4  中文名：鹽酸托烷司瓊  分子式：C17H21ClN2O2    Humanplasminogenactivatorinhibitor，PAIELISAKit人纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒規格：96T/48T

Tricetyl fingolimod  162358-09-0  中文名：  分子式：C25H39NO5    兔子血小板活化因子(PAF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Fingolimod   162359-56-0  中文名：鹽酸芬戈莫德  分子式：C19H34ClNO2    Rat angiopoietin receptor Tie1 (ANG-R-Tie1) ELISA Kit 大鼠生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA試劑盒

其它天然產物              Humanhiston-H2bELISAKit 人組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝