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    人巨噬細胞刺激蛋白ELISA檢測試劑盒實驗原理

    發表時間:2025-05-14
    人巨噬細胞刺激蛋白(MSP)ELISA檢測試劑盒的實驗原理基于雙抗體夾心法,通過特異性抗體對目標蛋白的高效捕獲與檢測實現定量分析。以下是實驗過程的詳細展開:

    **1. 樣本預處理與加樣**  
    待測樣本(血清、血漿或細胞培養上清)需經離心去除雜質,避免纖維蛋白原干擾。稀釋后的樣本與標準品同步加入預包被抗MSP單克隆抗體的微孔板中,37℃孵育1小時,抗體通過疏水作用與板壁牢固結合,形成固相免疫復合物。

    **2. 洗滌與酶標抗體結合**  
    洗板機采用8道垂直沖洗,去除未結合蛋白后,加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗。該抗體針對MSP的不同表位設計,與捕獲抗體構成"三明治"結構,確保檢測特異性。45分鐘溫育過程中,酶標抗體與目標蛋白的濃度梯度呈正相關。

    **3. 顯色反應與終止**  
    TMB底物在HRP催化下發生氧化還原反應,生成藍色產物。反應10分鐘后,硫酸終止液使溶液轉為黃色,此時450nm波長處的吸光度值與MSP濃度成正比。關鍵控制點包括:顯色時間需精確至±15秒,避免強光直射導致底物降解。

    **4. 數據分析與質量控制**  
    酶標儀自動繪制標準曲線(通常R2≥0.99),未知樣本濃度通過四參數擬合計算。每板應設置空白孔(僅緩沖液)、陰性對照(不含MSP樣本)及復孔(CV<10%)。異常值需結合樣本稀釋線性(80%-120%回收率為合格)判斷是否重測。

    **注意事項**  
    ? 溶血樣本會釋放血紅素抑制HRP活性,需重新采集  
    ? 板條開封后需密封防潮,避免抗體效價下降  
    ? 冬季實驗時建議預熱洗液至25℃,防止洗滌不徹底  

    該技術可檢測低至15pg/mL的MSP,為研究巨噬細胞活化機制及炎癥性疾病提供精準工具。后續實驗可結合Western Blot驗證,或通過阻斷實驗確認抗體特異性。
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